HASAN ÖZEN, MUSA KARAMAN, MİTAT ŞAHİN, KADİR ÖZCAN

Pnömonili sığırlarda Mycoplasma bovis, M. dispar, M. bovirhinis ve M. mycoides subsp. mycoides (küçük koloni tipi)'in PZR ile belirlenerek patolojik bulguların incelenmesi

Bu çalışma ile Kars ilinde pnömonili sığırlarda Mycoplasma bovis, M. dispar, M. bovirhinis ve M. mycoides subsp. mycoides (küçük koloni tipi)’in insidensleri belirlenerek pnömonili akciğerlerde gözlenen histopatolojik değişiklikler değerlendirildi. Bu amaçla, kesimi takiben makroskopik olarak akciğerlerinde lezyon tespit edilen 100 adet sığırdan elde edilen doku örnekleri rutin olarak işlenerek mikroskopta incelendi. Bakteriyolojik incelemeler için alınan dokular Mycoplasma agar ve brothda ekimleri yapılarak “L” koloni formları arandı. Polimeraz zincir reaksiyonu (PZR) amacıyla alınan doku parçalarından elde edilen total DNA örneklerinde belirtilen Mycoplasma etkenlerine spesifik oligoprimer çiftleri kullanılarak DNA amplifikasyonları yapıldı ve %1.5’luk agaroz jelde elektroforetik olarak koşuldu. Histopatolojik incelemelerde kataraldan granulomatöze kadar değişen tiplerde pnömonilere rastlandı. Özellikle Mycoplasma etkenleri tarafından oluşturulan fibrinöz tabiattaki pnömonilerde değişen derecelerde olmak üzere koagulasyon nekrozuna, bu nekroza eşlik eden nötrofil lökosit ve mononükleer hücre infiltrasyonları ile ödem, fibrin, yer yer tromboz ve plörada kalınlaşmalara rastlandı. PZR analizlerinde M. bovis, M. dispar ve M. bovirhinis’e spesifik sırasıyla 400, 433 ve 316 baz çifti uzunluğunda bantlar tespit edildi. Fibrinöz pnömonili vakalarda olmak üzere M. bovis ve M. dispar sırasıyla 4 ve 6 vakada belirlendi. M. bovirhinis toplam 11 vakada tespit edilirken bunların 7’si fibrinöz pnömonili hayvanlarda gözlendi. M. bovirhinis 1’er vakada olmak üzere M. bovis ve M. dispar ile beraber belirlendi. Bakteriyolojik ekimler sonucunda hiçbir vakada Mycoplasma izolasyonu gerçekleşmedi.

Anahtar Kelimeler:

karşılaştırmalar, sığır, Mycoplasma mycoides, patoloji, akciğerler, histopatoloji, tanı teknikleri, kültür teknikleri, Mycoplasma bovirhinis, Mycoplasma bovis, Mycoplasma dispar, zatürre, polimeraz zincir reaksiyonu

PCR detection of Mycoplasma bovis, M. dispar, M. bovirhinis and M. mycoides subsp. mycoides (small colony type) and ınvestigations of pathological findings in pneumonic cattle

In this study, incidence of Mycoplasma bovis, M. dispar, M. bovirhinis and M. mycoides subsp. mycoides (small colony type) was determined, and the histopathological changes in the lungs were investigated in the pneumonic cattle living in Kars. For this purpose, lung samples were collected from 100 pneumonic cattle that were grossly detected after slaughter, and processed routinely for histopathological examination. Bacteriological investigations were performed by inoculating the tissue samples onto Mycoplasma agar and broth, and searching for “L” colony type. Using specific oligoprimer pairs for the Mycoplasma species, DNA amplifications were carried out by polymerase chain reaction (PCR) and the amplicons were electrophoretically run in 1.5% agarose gel. In histopathological examinations, pneumonias ranging from catharal to granulomatous were determined. Microscopic observations of fibrinous pneumonias, which are caused by Mycoplasmas, revealed coagulation necrosis, accompanying neutrophile and mononuclear cell infiltration, edema, fibrin, occasional thrombosis and thickening of pleura. In PCR analysis, 400, 433 and 316 base pair long bands representative of M. bovis, M. dispar and M. bovirhinis were detected, respectively. M. bovis and M. dispar were detected, only in animals with fibrinous pneumonia, in 4 and 6 animals, respectively. M. bovirhinis was determined in 11 animals of which 7 were in animals with fibrinous pneumonia. M. bovirhinis was found as a mix agent in 1 animal each with M. bovis and M. dispar. Isolation of Mycoplasma was not accomplished in any of the animals by bacteriological culture technique.

Keywords:

comparisons, cattle, Mycoplasma mycoides, pathology, lungs, histopathology, diagnostic techniques, culture techniques, Mycoplasma bovirhinis, Mycoplasma bovis, Mycoplasma dispar, pneumonia, polymerase chain reaction,

PDF

___

Aytuğ CN: Solunum sistemi hatalıkları. In, Aytuğ CN, Alaçam E, Görgül S (Eds): Sığır Hastalıkları. 109-127.
TÜM-VET Hayvancılık Hizmetleri Yayını. İstanbul, Türkiye, 1989.
Jones TC, Hunt RD, King NW: The Respiratory System. In, Cann C (Ed): Veterinary Pathology, 6th ed. 947-973.
Williams & Wilkins. Baltimore, Maryland, USA, 1997.
Hazıroğlu R: Solunum Sistemi. In, Hazıroğlu R, Milli ÜH (Eds): Veteriner Patoloji, II. cilt. 1-130. Tamer Matbaacılık, Yayıncılık, Tan. Hiz. Tic. ve Paz. Ltd. Şti. Ankara, Türkiye, 1998.
Egwu GO, Nicholas RAJ, Ameh JA, Bashiruddin JB: Contagious bovine pleuropneumonia: An update. Vet Bull, 66, 875-888, 1996.
Razin S, Freundt EA: The mycoplasmas. In, Tansill B (Ed): Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology, Vol. 1. 740- 741. Williams & Wilkins. Baltimore, Maryland, USA,1984.
Razin S, Yogev D, Naot Y: Molecular biology and pathogenicity of mycoplasmas. Mic Mol Biol Rev, 62, 1094-1156, 1998.
Alberti A, Addis MF, Chessa B, Cubeddu T, Profiti M, Rosati S, Ruiu A, Pittau M: Molecular and antigenic characterization of a Mycoplasma bovis strain causing an outbreak of infectious keratoconjunctivitis. J Vet Diagn Invest, 18, 41-51, 2006.
Marques LM, Buzinhani M, Yamaguti M, Oliveira RC, Ferreira JB, Mettifogo E, Timenetsky J: Use of a polymerase chain reaction for detection of Mycoplasma dispar in the nasal mucus of calves. J Vet Diagn Invest, 19, 103–106, 2007.
Kobayashi H, Hirose K, Worarach A, Paugtes P, Ito N, Morozumi T, Yamamoto K: In vitro amplification of the 16S rRNA genes from Mycoplasma bovirhinis, Mycoplasma alkalescens and Mycoplasma bovigenitalium by PCR. J Vet Med Sci, 60, 1299-1303, 1998.
Miles K, Churchward CP, McAuliffe L, Ayling RD, Nicholas RAJ: Identification and differentiation of European and African/Australian strains of Mycoplasma mycoides subspecies mycoides small-colony type using polymerase chain reaction analysis. J Vet Diagn Invest, 18, 168-171, 2006.
Thomas LH, Swann RG: Influence of colostrum on the incidence of calf pneumonia. Vet Rec, 92, 454-455, 1973.
Özer H: Besi danalarında eksudative pneumonielerin yayılışı. Elazığ Bölgesi Vet Hek Od Derg, 3, 63-70, 1985.
Özer H: Besi sığırlarında atipik interstitial pneumonie’lerin yayılışı. Fırat Üniv Sağlık Bil Derg, 1, 27-34, 1987.
Caldow GL, Edwards S, Nixon P, Peters AR: Associations between viral infection and respiratory disease in young beef bulls. Vet Rec, 122, 529-531, 1988.
Haritani M, Nakazawa M, Hashimoto K, Narita M, Tagawa I, Nakagawa M: Immunoperoxidase evaluation of the relationship between necrotic lesions and causative bacteria in lungs of calves with naturally acquired pneumonia. Am J Vet Res, 51, 1975-1979, 1990.
Maity B, Deb P: Seasonal variation in incidence of pneumonia in cattle. Ind J Anim Sci, 61, 261-262, 1991.
Aytuğ N, Tavukçuoğlu F, Çöven F: Bursa yöresindeki enzootik buzağılarında PI-3 virüsünün insidensi ve aşılamanın klinik pnömonilerin önlenmesindeki etkinliği üzerine bir araştırma. Pendik Hayv Hast Merk Araşt Enst Derg, 23, 51-57, 1992.
Öztürk G, Özcan C, Kalender H: Elazığ et ve balık kurumu mezbahasında kesilen sığırlarda rastlanan pnöymonilerin patolojik ve bakteriyolojik olarak incelenmesi. Pendik Vet Mikrobiyol Derg, 27, 163-174, 1996.
Ortatatlı M, Çiftçi MK: Konya bölgesi mezbahalarında kesilen besi danalarında pnömonilerin insidensi ve patolojisi. Veterinarium, 16, 24-35, 2005.
Kılıç A, Muz A: Pnömonili sığır akciğerlerinden bakteri izolasyonları ve izole Pasteurella’ların polimeraz zincir reaksiyonu ile saptanması. Turk J Vet Anim Sci, 28, 217- 223, 2002.
Tenk M: Examination of Mycoplasma bovis infection in cattle. PhD Dissertation , Szent István University, Budapest, Hungary, 2005.
Gourlay RN, Thomas LH, Howard CJ: Pneumonia and arthritis in gnotobiotic calves following inoculation with Mycoplasma agalactiae subsp bovis. Vet Rec, 98, 506- 507 (1976).
Thomas LH, Howard CJ, Stott EJ, Parsons KR: Mycoplasma bovis infection in gnotobiotic calves and combined infection with respiratory syncytial virus. Vet Pathol, 23, 571-578, 1986.
Buchvarova Y, Vesselinova A: On the aetiopathogenesis of Mycoplasma pneumonia in calf. Arch Exper Vet Med Leipzig, 43, 685-689, 1989.
Gourlay RN, Houghton SB: Experimental pneumonia in conventionally reared and gnotobiotic calves by dual infection with Mycoplasma bovis and Pasteurella haemolytica. Res Vet Sci, 38, 377-382, 1985.
Thomas A, Ball H, Dizier I, Trolin A, Bell C, Mainil J, Linden A: Isolation of Mycoplasma species from the lower respiratory tract of healthy cattle and cattle with respiratory disease in Belgium. Vet Rec, 151, 472-476, 2002.
Adehan R, Youssao Abdou Karim I: Epizootiology of pulmonary mycoplasmosis of domestic ruminants in Benin. Revue Med Vet, 153, 415-418, 2002.
Nicholas RA, Ayling RD: Mycoplasma bovis: Disease, diagnosis, and control. Res Vet Sci, 74, 105-112, 2003.
Cai HY, Bell-Rogers P, Parker L, Prescott JF: Development of a real-time PCR for detection of Mycoplasma bovis in bovine milk and lung samples. J Vet Diagn Invest, 17, 537-545, 2005.
Sachse K, Pfützner H, Hotzel H, Demuth B, Heller M, Berthold E: Comparison of various diagnostic methods for the detection of Mycoplasma bovis. Rev Sci Tech, 12, 571-580, 1993.
Gourlay RN, Thomas LH, Wyld SG: Increased severity of calf pneumonia associated with the appearance of Mycoplasma bovis in a rearing herd. Vet Rec, 124, 420-422, 1989.
Schiefer B, Ward GE, Moffatt RE: Correlations of microbiological and histological findings in bovine fibrinous pneumonia. Vet Pathol, 15, 313-321, 1978.
Gagea MI, Bateman KG, Dreumel TV, McEwen BJ, Carman S, Archambault M, Shanahan RA, Caswell JL: Diseases and pathogens associated with mortality in Ontario beef feedlots. J Vet Diagn Invest, 18, 18-28, 2006.
Tegtmeier C, Uttenthal A, Friis NF, Jensen NE, Jensen HE: Pathological and microbiological studies on pneumonic lungs from Danish calves. Zentralbl Veterinarmed B, 46, 693-700, 1999.