12048

Koyun dalak doku arginazının bazı kinetik özellikleri

Bu çalışma ile koyun dalak doku arginazının bazı kinetik özellikleri ilk kez laboratuarımızda optimize edilmiştir. Çalışmada kullanılan dalak dokuları Elazığ'daki Elkas kesimevinden temin edilmiştir. Arginaz aktivitesini ölçmede tiyosemikarbaziddiasetilmonoksim üre (TDMU) metodu kullanılmıştır. Protein Lowry ve arkadaşlarının metoduna göre ölçülmüştür. Koyun dalak doku arginazı için preinkübasyon ısısı 58°C, preinkübasyon zamanı 13 dak., inkübasyon zamanı 10 dak. ve optimum pH 9.5 olarak bulunmuştur. Ayrıca koyun dalak doku arginazının çeşitli metal iyonlarına karşı duyarlılığı tespit edilmiş ve metal iyonları (Mn+2, Cu+2, Mg+2, Ba+2, Fe+3, Ag+1, Cr+3, Sn+2, Hg+2, Pb+2, Co+2, Ni+2, Zn+2, Cd+2, Li+1, K+1, Al+3, Mo+6, Na+1 ve Ca+2) içinde enzim aktivitesi üzerine en etkili metal iyonunun Mn+2 olduğu bulunmuştur. Enzim 2 mM'lık MnCl2 derişiminde en yüksek aktiviteyi göstermiştir. Pb+2 ve Ag+1 iyonları varlığında enzim hiç aktivite göstermemiştir. Koyun dalak doku arginazının arginin için Km’i 6 mM olarak saptanmıştır.

Anahtar Kelimeler:

arginaz, enzim aktivitesi, koyun, dalak, dokular, kinetik, mineraller

Some kinetic properties of agrinase in sheep spleen tissue

In this study, some kinetic properties of arginase in the sheep spleen tissue was been optimized at first time in our laboratory. The spleen tissues used in the present study were obtained from the Elkas sloughterhause in Elazıg. The thiosemicarbazide- diacetylmonoxime urea (TDMU) method was used to measure arginase activity. Protein was measured by the method of Lowry et al. Its was found to be preincubation temperature 58°C, preincubation period 13 min, incubation period 10 min and optimum pH 9.5 for sheep spleen tıssues. Furthermore, it was found that arginase in sheep spleen tissue was sensitive to different metal ions. It was found that the most effective was Mn+2 from among (Mn+2, Cu+2, Mg+2, Ba+2, Fe+3, Ag+1, Cr+3, Sn+2, Hg+2, Pb+2, Co+2, Ni+2, Zn+2, Cd+2, Li+1, K+1, Al+3, Mo+6, Na+1 and Ca+2) metal ions. Arginase showed the highest activity in a 2 mM MnCl2 concentration. The enzyme has no activity in presence of Pb+2 and Ag+1 ions. Km of arginase in sheep spleen tissue for arginine were determined tobe 6 mM.

Keywords:

arginase, enzyme activity, sheep, spleen, tissues, kinetics, minerals,

PDF

___

1. Colombo JP, Konarska L: Arginase. In, Bergmeyer HU (Ed): Methods of Enzymatic Analysis. 3rd ed. 285-294, Verlag Chemie, Weinheim, 1984.
2. Kepka-Lenhart D, Ash DE, Morris SM: Determination of mammalian arginase activity. Methods Enzymol, 440, 221- 230, 2008.
3. Kandemir FM, Özdemir N: L-Lizin ve L-ornitinin sığır böbrek doku arginaz aktivitesi üzerine inhibisyon etkisi. Fırat Üniv Sağ Bil Derg (Vet), 22 (1): 1-4, 2008.
4. Gökmen SS, Yörük Y, Çakır E, Yorulmaz F, Gülen Ş: Arginase and ornithine, as markers in human non-small cell lung carcinoma. Cancer Biochem Biophys, 17 (1-2): 125-131,1999.
5. Belik J, Shehnaz D, Pan J, Grasemann H: Developmental changes in arginase expression and activity in the lung. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol, 294 (3): 498-504, 2008.
6. Maarsingh H, Pera T, Meurs H: Arginase and pulmonary diseases. Naunyn-Schmiedberg’s Arch Pharmacol, 378 (2): 171-184, 2008.
7. Erbaş H, Erten O, Dağlar A, İrfanoğlu ME: Meme kist sıvısı arginaz aktivitesi, ornitin ve üre düzeyleri. Turk J Bioch, 31 (3): 129-134, 2006.
8. Wu CW, Wang SR, Chang TJ, Lin EC, Chang KL, Huang MH, Lui WY, P'eng FK, Chi CW: Content of glucocorticoid receptor and arginase in gastric cancer and normal gastric mucosal tıssues. Cancer, 64 (12): 2552-2556, 1989.
9. Wu CW, Chi CW, Tsay SH, Lui WY, Peng FK, Chang KL, Huang MH, Wang SR: The effects of arginase on neoplasm. I. The role of arginase in the immunosuppressive effects of extract from gastric cancer. Zhonghua Min Guo Wei Sheng Wu Ji Mian Yi Xue Za Zhi, 20 (4): 279-89, 1987.
10. Bachetti T, Comini L, Francolini G, Bastianon D, Valetti B, Cadei M, Grigolato PG, Suzuki H, Finazzi D, Albertini A, Curello S, Ferrari R: Arginase pathway in human endothelial cells in pathophysiological conditions. J Mol Cell Cardiol, 37 (2): 515-523, 2004.
11. Kumar AN, Kalyankar GD: Effect of steroid hormones on age dependent changes in rat arginase ısoenzymes. Exp Gerontol, 19 (3): 191-198, 1984.
12. Erisir M, Aydilek N, Aksakal M: Effect of vitamin E on arginase activity in the liver and kidneys of testosteronetreated and castrated rabbits. Acta Vet Brno, 74 (4): 527-531,2005.
13. Konarska L, Tomaszewski L, Rolezyk U: Studies on Larginase in developing rat small ıntestine, brain and kidney. Biochem Med Metab Biol, 35 (2): 170-178, 1986.
14. Cuervo H, Pineda MA, Aoki MP, Gea S, Fresno M, Girones N: Inducible nitric oxide synthase and arginase expression in heart tissue during acute trypanosoma cruzi infection in mice: arginase I is expressed in infiltrating CD68+ macrophages. J Infect Dis, 197 (12): 1772-1782, 2008.
15. Mohamed SA, Fahmy AS, Mohamed TM, Hamdy SM: Urea cycle of Fasciola gigantica : Purification and characterization of arginase. Comp Biochem Physiol, B Biochem Mol Biol, 142 (3): 308-316, 2005.
16. Geyer JW, Dabich D: Rapid method for determination of arginase activity in tissue homogenates. Anal Biochem, 39 (2): 412-417, 1971.
17. Kaplan LA: Urea. In, Pesce AJ, Kaplan LA (Eds): Methods in Clinical Chemistry. 22-27, The CV Mosby Company, Toronto, 1987.
18. Lowry OH, Rosenbrough NJ, Farr AL, Randall RJ: Protein measurements with the folin phenol reagent. J Biol Chem, 193 (1): 265-275, 1951.
19. Mohammed SM, Greenberg DM: Liver arginase I. preperation of extracts of high potency, chemical properties, activation, inhibition and pH activity. Arch Biochem Biophys, 8, 349-357, 1945.
20. Özçelik M, Özdemir N: Koyun meme doku arginazının bazı biyokimyasal özellikleri. Turk J Vet Anim Sci, 27 (3): 719-725, 2003.
21. Konarska L, Tomaszewski L, Colombo JP, Terheggen HG: Human salivary arginase and its deficiency in argininemia. J Clin Chem Clin Biochem, 23 (6): 337-342, 1985.
22. İlhan N: İnsan tiroid doku arginazının bazı kinetik özellikleri. Erciyes Tıp Derg, 16 (3): 217-221, 1994.
23. Halifeoğlu İ: İnsan karaciğer, eritrosit ve uterus doku arginazının kinetik özellikleri. Doktora Tezi. Fırat Üniv Sağl Bil Enst, Elazığ, 1993.
24. Altundağ Y: Bronj lavaj sıvısında arginaz enziminin özellikleri ve klinik diagnostik önemi. Uzmanlık Tezi. Trakya Üniv Tıp Fak Biyokimya Anabilim Dalı, Edirne, 2001.
25. Erisir M, Ercel S, Yılmaz S, Ozan S: Evaluation of optimal conditions for arginase activity in streptozotosin induced diabetic rats. Vet Med Czech, 50 (2): 69-76, 2005.
26. Erişir M, Ozan ST: Some properties of purified and nonpurified rumen tissue arginase in cattle. Turk J Vet Anim Sci, 23 (3): 597-608, 1999.
27. Özdemir N: Moniezia benedeni arginazının bazı özellikleri. Doktora Tezi. Fırat Üniv Sağ Bil Enst, Elazığ, 1990.
28. Benzer F, Ozan ST: Fascioliosisli koyunların arginaz enzim aktivite düzeyleri ile karaciğer doku arginazının bazı biyokimyasal özellikleri. Fırat Üniv Sağ Bil Derg (Vet), 16 (2): 217-222, 2002.
29. Gürsu MF, Ozan S, Gülen Ş: Çeşitli türlerin humor vitreuslarında üre, ornitin ve sitrülin düzeyleri ile arginaz aktiviteleri. Turk J Vet Anim Sci, 18, 87-91, 1994.
30. Muszynska G, Wojtczak M: Influence of ımmobilization on conformation of rat liver arginase. Int J Biochem, 10 (8): 665-668, 1979.
31. lhan N, Gülen Ş: Tiroid arginaz enzim aktivitesinin farklı metal iyonları varlığında ısıya karşı stabilitesi. Turk J Bioch, 18 (4): 59-67, 1993.
32. Soler G, Mataix FJ, Ruiz-Amil M: Physico-chemical properties of guinea pig liver arginase (author's transl). Rev Esp Fisiol, 37 (1): 37-44, 1981.
33. Spector EB, Rice SCH, Moedjono S, Bernard B, Cederbaum S: Biochemical properties of arginase in human adult and fetal tissues. Biochem Med, 28 (2): 165-175, 1982.
34. Chen PC, Broome JD: Mouse macrophage arginase. Proc Soc Exp Biol Med, 163 (3): 354-359, 1980.
35. Carnaval N, Bustamante M, Hinrichsen P, Torres A: Properties of arginase from the Sea mollusc (concholepas concholepas). Comp Biochem Physiol Part B: Biochem Mol Biol, 78 (3): 591-594, 1984.
36. Ozan S, Gürsu MF, Gülen Ş: Kısmen arıtılmış Moniezia expensa arginazının bazı özellikleri. Turk J Vet Anim Sci, 17, 245-250, 1993.