Detection of American foulbrood disease (Paenibacillus larvae) By the PCR and culture

Amerikan yavru çürüklüğü dünyanın her yerinde bal arılarının larvalarında görülen ve Paenibacillus larvae tarafından meydana getirilen bakteriyel bir hastalıktır. Bu araştırmada P. larvae’nin hastalıktan şüpheli kovanlardan alınan bal ve balmumu örneklerinde kültür ve direk PZR metodu ile teşhis edilmesi amaçlandı. P. larvae DNA’sını tespit etmek amacıyla en duyarlı AF6 ve AF7 primer çifti kullanıldı. Bu amaçla, hastalıktan şüphe edilen 25 farklı işletmeden alınan 100 adet bal ve bal mumu örneği incelendi. PZR pozitif 8 örneğin 7’sinde kültür yöntemi ile P. larvae teşhisi yapıldı. Sekiz adet balarısı larvası PZR ile pozitif bulundu. Kültür negatif olan bir şüpheli örnek PZR ile pozitif bulunmuştur. Direkt bal ve balmumu PZR denemelerinde 1 tane balmumu, 7 adet bal örneğinde pozitiflik saptandı.

Anahtar Kelimeler:

balmumu, polimeraz zincir reaksiyonu, larva, bal, saptama, Paenibacillus larvae, Amerikan yavru çürüklüğü

Amerikan yavru çürüklüğü hastalığı etkeni (Paenibacillus larvae)’nin PCR ve kültür ile teşhisi

American foulbrood (AFB) caused by Paenibacillus larvae is a bacterial disease in honey bee larvae that is observed worldwide. The aim of this study was to detect P. larvae in honey and beeswax samples from the suspected hives by direct PCR and culture growth. AF6 and AF7, the most sensitive pair of primers, were used to identify the DNA of P. larvae. A total of 100 suspected honey and beeswax samples collected from 25 different enterprises were examined. P. larvae were identified in 7 samples out of 8 by the PCR positive in total. Eight suspected larvae of honeybees were found positive by PCR. A suspected culture-negative sample was found positive through evaluation with PCR. One beeswax sample and seven honey samples were detected as positive for the larvae in the direct PCR detection.

Keywords:

beeswax, polymerase chain reaction, larvae, honey, detection, Paenibacillus larvae, American foul brood,

PDF

___

1.Coşkun ŞZ: Arıların Bakteriyel Hastalıkları. Türkiye Parazitol Derg, 18 (2): 204-208, 1994.
2.Doğanay A: Arı Hastalıkları. Balarısı Hakkında Genel Bilgi. Turk Vet Hek Dern Derg, 5 (2): 29-35, 1993.
3.Aydın N, Bülbül H, Bıyıkoğlu G, Yaralı C, Yavuz MK: Kovanlardan ve tüketime sunulan bal örneklerinden Peanibacillus larvae’nın izolasyonu. Etlik Vet Mikrob Derg, 10 (1): 93-100, 1997.
4.Hornitzhy MAZ, Clark S: Culture of Bacillus larvae from bulk honey samples for the detection of American foulbrood. J Apicul Res, 30 (1): 13-16, 1991.
5.Bailey L: Honey Bee Pathology. Academic Press, ISBN 0 12-073480, 1981.
6. Faucon JP: Précis de Pathologie: Connaître et traiter les maladies des abeilles. Vol. 1, p. 512, Cneva-Fnosad, 1992.
7. Morse RA, Nowogrodzki R: Honey bee Pests Predators and Diseases. 2nd ed., Comstock Publish Assoc, London, 1990.
8. Zeybek H: Arı Hastalıkları ve Zararlıları. TKİB Hayvan Hastalıkları Araştırma Enstitüsü Müdürlüğü Yayınları, Ankara, 1991.
9. Govan VA, Allsopp MH, Davison S: A PCR detection method for rapid identification of Paenibacillus larvae. Appl Env Microbiol, 65, 2243-2245, 1999.
10. Tutkun E, İnci A: Bal Arısı Zararlıları ve Tedavi Yöntemleri. Demircioğlu Matbaacılık, Ankara, 81-92, 1992.
11. Doğanay A: Türkiye’de arılarda görülen bazı önemli hastalıklar. Türk Vet Hek Dern Derg, 9 (1): 49-54, 1997.
12. Alippi AM: Background on American foulbrood in Argentina. Bee World, 78 (2): 92-95, 1997.
13. Alippi AM: Characterization of Bacillus larvae white, the causative agent of American foulbrood of honey bees. First record of its occurrence in Argentina. Rev Arg Microbiol, 24, 67-72, 1992.
14. Bilgehan H: Klinik Mikrobiyolojik Tanı. 1.Baskı, Barış Yayınları, Fakülteler Kitabevi, 1993.
15. Lloyd JM: Simplified laboratory diagnosis of American foulbrood disease. J Apicul Res, 25 (1): 55-57, 1986.
16. Bakonyi T, Derakhshifar I, Grabensteiner E, Nowotny N: Development and evaluation of PCR assays for the detection of Paenibacillus larvae in honey samples: Comparison with isolation and biochemical characterization. Appl Environ Microbiol, 69, 1504-1510, 2003.
17. Lauerman LH: Nucleic acid amplification assays for diagnosis of animal diseases. Am Assoc Vet Lab Diagnost, 3966, 1998.
18. Dernakhshifar I: The appearence of American foulbrood spores in Austrian honeys as a diagnostic method for the early recognition of foulbrood Popul. Bienenvater, 116 (11): 464469, 1995.
19. Akmaz Ö: Adana yöresinde Amerikan yavru çürüklüğü hastalığının yaygınlığı. Pendik Vet Mikrobiyol Derg, 32 (1-2): 55-61, 2001.
20. Goodwin RM, Perry JH, Haine HM: A study on the Presence of Bacillus larvae spores carried by adult honey bees to identify colonies with clinical symptoms of American Foulbrood Disease. J Apicul Res, 35 (3-4): 118-120, 1996.
21. Kabay MJ: Evaluation of the culture of honey to detect American foulbrood. Aust Vet J, 72 (1): 33-34, 1995.
22. Oldroyd BP, Goodman RD, Hornitzky MAZ: The effect on American foulbrood of standart oxytetracycline hydrochloride treatments for the control of European foulbrood on honeybees (Apis mellifera). Aust J Agricult Res, 40, 691-697, 1989.
23. Akmaz Ö: Adana Yöresinde Amerikan Yavru Çürüklüğü hastalığının yaygınlığı. Pendik Vet Mikrobiyol Derg, 32 (1-2): 55-61, 2001.
24. Hornitzhy MAZ, Oldroyd BP, Somerville D: Bacillus larvae carrier status of swarms and fetal colonies of honey bees (Apis mellifera) in Australia. Aust Vet J, 73 (3): 116-117, 1996.
25. Kauko L, Niskanen M: Occurence and diagnosis of American foulbrood in SW Finland. Sectio DD Med Vet, 50 (825): 249-253, 1995.
26. Niskanen M, Kauko L, Johansson T: Detection of Bacillus larvae in honey by means of bovina blood agar. Suomen- Elainlaakarilehti, 101 (2): 73-78, 1995.
27. Şimşek H, Kalender H: Elazığ’daki arı işletmelerinde Amerikan Yavru Çürüklüğü Hastalığının araştırılması. Pendik Vet Mikrobiyol Derg, 33 (1-2): 27-32, 2001.
28. Dobbelaere WD, Graaf De DC, Peeters JE: Development of a fast and reliable diagnostic method for American foulbrood disease (Panibacillus larvae subsp. larvae) using 16SrRNA gene based PCR. Apidologie, 32, 363-370, 2001.
29. Alippi AM, Lopez Lopez AC, Aguilar OM: Differentiation of Paenibacillus larvae subsp larvae the cause of American foulbrood of honeybees by using PCR and restriction fragment analysis of genes encoding 16S rRNA. Appl Environ Microbiol, 68, 3655-3660, 2002.