Ahmet ÜNVER, Hidayet M. ERDOGAN, Halil İ. ATABAY, Mitat ŞAHİN, VEHBİ GÜNEŞ, MEHMET ÇİTİL, Halil İ GÖKÇE

Sığır atıklarından izole edilen brucella türlerinin RAPD-PCR ile genotiplendirilmesi

Brusellozis, Türkiye'de yagm olan ve ekonomik olarak büyük önem arz eden zoonotik bir infeksiyondur. Sığır brusellozisine neden olan ajanların genetik karekterizasyonu tam olarak ortaya konulmamıştır. Bu çalışma, Brucella türlerinin atık sığırlardan izolasyonu ve genotiplendirmesini amaçlamıştır. Altmışiki atık sığır fetusunun 37'sinden (59.7%) Brucella spp. izole ve identifıye edildi. Yirmiyedi suş rastgele çoğaltılmış polimorfik DNA-polimeraz zincir reaksiyonu (RAPD-PCR) tekniği ile analiz edildi ve elde edilen amplifiye DNA polimorfizmi bunların aşı ve tip suşları olan B. abortus S19 ve B. melitensis Revl polimorfizmi ile karşılaştırıldı. Oniki (44.4%) ve 15 (55.6%) susun RAPD profilleri sırası ile bunların B. abortus S19 ve B. melitensis Revl profilleri ile aynı bulundu. Bu sonuçlara dayanarak, sığır brusellozisinin teşhis, kontrol, eradikasyon ve salgın idaresinde her iki Brucella türü de (B. abortus ve B. melitensis) dikkate alınmalıdır.

Anahtar Kelimeler:

Brucella, yavru atma, sığır, genotip, polimeraz zincir reaksiyonu, rastgele çoğaltılmış polimorfik DNA

Genotiyping of Brucella spp. ısolated from aborted cattle fetuses by RAPD-PCR

Brucellosis is an endemic and economically important zoonotic infection in Turkey. Genetic characterization of the agents responsible for brucellosis in cattle has not been documented. The purpose of this study is to isolate and genotype Brucella spp. from aborted cattle fetuses. Brucella spp. was isolated and identified from 37 out of 62 (59.7%) aborted cattle fetuses. Twenty seven isolates were analyzed by randomly amplified polymorphic DNA-polymerase chain reaction (RAPD-PCR) and the amplified DNA polymorphisms were compared with those of vaccine and prototype strains of B. abortus (S19) and B. melitensis (Revl). The RAPD profiles of 12 (44.4%) and 15 (55.6%) isolates were found to be identical to those of B. abortus S19 and B. melitensis Revl, respectively. These results suggest that both Brucella spp., B. abortus and B. melitensis, should be considered for implementing diagnosis, control, eradication and outbreak management of bovine brucellosis in this region.

Keywords:

Brucella, abortion, cattle, genotypes, polymerase chain reaction, random amplified polymorphic DNA,

PDF

___

Radostits OM, Blood DC, Gay CC: Veterinary Medicine. (8th ed.) pp.787-813. London, 1994.
Corbel MJ: Brucellosis: An overview. Emerg Inf Diseases, 3 (2): 213-221, 1997.
Arda M, Minbay A, Aydın N, Leloğlu N, Kahraman M, Akay Ö, İlgaz A, İzgür M, Diker K S: Özel Mikrobiyoloji. Medisan, 1997.
Banai M: Control of small ruminant brucellosis by use of Brucella melitensis Rev. 1 vaccine: laboratory aspects and field observations. Vet Microbiol, 90,497-519,2002.
Baek BK, Lim CW, Rahman MS, Kim C, Oluoch A, Kakoma I: Brucella abortus infection in indigenous Korean dogs. Can J Vet Res, 67, 312-313, 2003.
Yardımcı H: Koyunlarda Brucella melitensis infeksiyonlanmn Agliitinasyon, Rose Bengal ve ELISA testleriyle ortaya konması ve bu testlerin teşhisteki değeri üzerinde bir araştırma (Doktora Tezi) Ankara, 1989.
Güllüce M: Kars ve çevresindeki sığırlarda Brucella abortus'a karşı oluşan antikorların ELISA ve diğer serolojik yöntemlerle (RBPT, SAT, MRT) saptanması ve sonuçların karşılaştırılması (Doktora Tezi) Kars, 1993.
Eroğlu M: Türkiye'de brusellozisin insidensi. Uluslararası Brusellosis Sempozyumu. 18-20 Ekim 1988, İstanbul, Türkiye, sf 33-35,1988.
Sağlam YS, Türkütanıt SS, Taştan R, Bozoğlu H, Otlu S: Kuzeydoğu Anadolu bölgesinde görülen bakteriyel sığır ve koyun abortlarının etiyolojik ve patolojik yönden incelenmesi. VetBilDerg, 14, 133-145, 1998.
Çetinkaya B, Öngör H, Muz A, Ertat HB, Kalender H, Erdoğan HM: Detection of Brucella species DNA in the stomach content of aborted sheep fetuses by PCR. Vet Rec, 144 (9): 239-240,1999.
Genç O, Otlu S, Şahin M, Aydın F, Gökçe HI: Seroprevalence of Brucellosis and Leptospirosis in Aborted Dairy Cows. Turk J Vet Anim Sci, 29, 359-366,2005.
Şahin M, Atabay Hİ, Otlu S, Ünver A, Çelebi Ö: Kars ve çevresininde bulunan insan, sığır ve koyunlarda Brusellozisin prevelansının serolojik ve kültürel metotlarla araştırılması. Veteriner Mikrobiyoloji Kongresi, 14-16 Eylül, Elazığ, 2004.
Şeyda T, Aydın F, Genç O, Güler MA, Baz E: Sığır serumunda Mikroaglütinasyon Testi (MAT) ile Brucella antikorlarının araştırılması. KAÜ Vet Fak Derg, 3 (1): 7-11, 1997.
İyisan AS, Akmaz Ö, Düzgün S, Ersoy Y, Eskiizmirliler S, Güler L, Gündüz K, Işık N, İçyerioğlu K, Kalender H, Karaman Z, Küçükayan U, Özcan C, Seyitoğlu Ş, Tuna İ, Tunca T, Üstünakm K, Yurtalan S: Türkiye' de sığır ve koyunlarda brucellosis' in seroepidemiyolojisi. Pendik Veteriner Mikrobiyoloji Dergisi, 31(1): 21-75, 2000.
Bricker BJ: PCR as a diagnostic tool for brucellosis. Vet Microbiol, 90(1-4): 435-446, 2002.
Baum M, Zamir O, Bergman-Rios R, Katz E, Beider Z, Cohen A, Banai M: Comperative evaluation of Microagglütination Test and serum Agglutination Test as supplementary diagnostic methods for Brucellosis. / Clin Microbiol, 33 (8):2166-2170, 1995.
Fekete A, Bantle JA, Hailing SH: Detection of Brucella by polymerase chain reaction in bovine fetal and maternal tissues. J VetDiagn Invest, 4(1): 79-83, 1992.
Herman L, deRidder H: Identification of Brucella spp. by using the Polymersae Chain Reaction. Appl Environ Microb, 58 (6): 2099-2101, 1992.
Leyla G, Kadri G, Ümran O: Comparison of polymerase chain reaction and bacteriological culture for the diagnosis of sheep brucellosis using aborted fetus samples. Vet Microbiol, 93: 53-61, 2003.
Tcherneva E, Rijpens N, Jersek B, Herman LM: Differentiation of Brucella species by random amplified polymorphic DNA analysis. J Appl Microbiol, 88(1): 69-80, 2000.
Cloeckaert A, Verger JM, Grayon M, Grepinet O: Restriction site polymorphism of the genes encoding the major 25 kDa and 36 kDa outer-membrane proteins of Brucella. Microbiology, 141,2111-2121, 1995.
Allardet-Servent A, Carles-Nurit MJ, Bourg G, Michaux S, Ramuz M: Physical map of the Brucella melitensis 16 M chromosome. J Bacteriol, 173(7): 2219-2224, 1991.
Whatmore AM, Murphy TJ, Shankster S, Young E, Cutler SJ, Macmillan AP: Use of amplified fragment length polymorphism to identify and type Brucella isolates of medical and veterinary interest. / Clin Microbiol, 43(2):761-769, 2005.
Mercier E, Jumas-Bilak E, Allardet-Servent A, O'Callaghan D, Ramuz M: Polymorphism in Brucella strains detected by studying distribution of two short repetitive DNA elements. J Clin Microbiol, 34(5): 1299-1302, 1996.
Tcherneva E, Rijpens N, Naydensky C, Herman L: Repetitive element sequence based polymerase chain reaction for typing of Brucella strains. Vet Microbiol, 51(1 -2): 169-178, 1996
Bricker BJ, Ewalt DR: Evaluation of the HOOF-Print assay for typing Brucella abortus strains isolated from cattle in the United States: results with four performance criteria. BMC Microbiol, 5, 37, 2005.
Erdoğan HM: An Epidemiological Study of Listeriosis in Dairy Cattle in England. PhD Thesis University of Bristol, UK, 1998.
Erdoğan HM, Çitil M, Güneş V, Unver A: Dairy Cattle Farming in Kars District, Turkey: II. Health Status. Turk J Vet Anim Sci, 28, 745-752, 2004.