HÜBAN GÖÇMEN, MİHRİBAN ÜLGEN, K. Tayfun ÇARLI, Kaan ÖNAT, SERPİL KAHYA DEMİRBİLEK, Ümit ÖZDEMİR, BURAK MAT

Koyun ve keçilerde Bulaşıcı Agalaksi hastalığının bakteriyolojik ve PCR metotları ile araştırılması

Bu çalışmada, koyun ve keçilerde Bulaşıcı Agalaksi hastalığının varlığını bakteriyolojik ve moleküler yöntemler ile teşhis etmek amaçlandı. Bursa, Balıkesir, Çanakkale ve Edirne illerine ait koyun ve keçilerden toplanan 339 adet örnek bakteriyolojik ve moleküler yöntemlerle incelendi. Örneklerin 162 adedini süt örneği, 147 adedini göz svabı, 15 adedini eklem sıvısı, 11 adedini burun svabı ve 4 adedini de akciğer dokusu oluşturmuştur. Bakteriyolojik incelemede 29 izolat Mycoplasma sp. olarak değerlendirildi. Uygulanan biyokimyasal testler ve üreme inhibisyon testleri sonucunda, 29 (%8.55) izolatın 25i (%7.37) Mycoplasma agalactiae olarak, 2 (%0.58)si Mycoplasma ovipneumoniae ve 2 (%0.58)si de Mycoplasma arginini olarak identifiye edildi. Moleküler teşhiste ise, polC-PCR sonucunda %9.14 oranında M. agalactiae pozitif bulundu. PCR bulguları ile bakteriyolojik bulgular karşılaştırıldığında, 5 süt örneği ve 1 akciğer örneği polC-PCR ile M. agalactiae pozitif bulunurken, kültür ile negatif bulundu. PolC-PCR sonuçlarına göre, süt örnekleri %14.19 oranı ile, eklem sıvı örnekleri %13.33 oranı ile, göz svabı örnekleri %2.72 oranı ile ve akciğer örnekleri %50 oranı ile pozitif bulunurken, burun svabı örnekleri negatif bulundu. Bu çalışmada, Bulaşıcı Agalaksi hastalığının varlığı bakteriyolojik ve moleküler yöntemler ile araştırılmış ve başlıca hastalığa neden olan etkenin M. agalactiae olduğu tespit edilmiştir, hastalığa neden olan diğer mikoplazma etkenlerine rastlanılmamıştır.

Investigation of Contagious Agalactia by bacteriological and PCR methods in sheep and goats

The aim of this study was diagnosis that occurrence of Contagious Agalactia by bacteriological and molecular methods in sheep and goats. A total of 339 samples from sheep and goats in Bursa, Balıkesir, Çanakkale and Edirne provinces were examined by bacteriological and molecular methods. The samples were 162 milk samples,147 eye swabs, 15 joint fuids, 11 nasal swabs and 4 lung tissue. In bacteriological examination, 29 isolates were evaluated as Mycoplasma sp.. As a result of biochemical tests and growth inhibition tests, 29 (8.55%) Mycoplasma sp. were identified as 25 (7.37%) Mycoplasma agalactiae , 2 (0.58%) Mycoplasma ovipneumoniae and 2 (0.58%) Mycoplasma arginini. In molecular diagnosis, polC gene-PCR results could be detected M. agalactiae positive with 9.14% rate. As a result of this, 5 milk samples and 1 lung tissue sample were detected positive by polC-PCR while negative by bacteriological examination. The results of polC-PCR detected M. agalactiae positive with 14.19% rate of milk samples, 13.33% rate of joint fuids, 2.72% rate of eye swabs and 50% rate of lung tissue samples but nasal swabs were detected as negative. In this study, presence of Contagious Agalactia were investigated by bacteriological and molecular methods and M. agalactiae was detected as a main agent which cause disease however other Mycoplasma species which cause disease were not observed.

PDF

___

1. Office International des Epizooties (OIE): Contagious agalactia. In, Terrestrial Manual, 992-997, 2008.
2. Bergonier D, Berthelot X, Poumarat F: Contagious agalactia of small ruminants: current knowledge concerning epidemiology, diagnosis and control. Rev Sci Tech, 16, 848-873, 1997.
3. Lambert M: Contagious agalactia in sheep and goats. Rev Sci Tech, 6, 699-711, 1987.
4. Nicholas RAJ: Improvements in the diagnosis and control of diseases of small ruminants caused by mycoplasmas. Small Rumin Res, 45, 145-149, 2002.
5. Madanat M, Zendulkova D, Pospisil Z: Contagious Agalactia of sheep and goats. Acta Vet Brno, 70, 403-412, 2001.
6. Corrales JC, Esnal A, Fe C, Sanchez A, Assunçao P: Contagious agalactia in small ruminants. Small Rumin Res, 68, 156-166, 2007.
7. Nicholas RAJ, Ayling R, Mcaulife A: Contagious Agalactia. In, Mycoplasma Diseases of Ruminants 98-113, Cabı Publishing, UK, 2008.
8. Özen H, Kahraman M, Şahin M, Özcan K: Pnömonili Sığırlarda Mycoplasma bovis, M. dispar, M. bovirhinis ve M. mycoides subsp. mycoides (küçük koloni tipi)in PZR ile belirlenerek patolojik bulguların incelenmesi. Kafkas Univ Vet Fak Derg,15 (1): 125-133, 2009.
9. Akan M, Babacan O,Torun E, Müştak HK, Öncel T: Diagnosis of Mycoplasma bovis infection in cattle by ELISA and PCR. Kafkas Univ Vet Fak Derg, 20 (2): 249-252, 2014. DOI: 10.9775/kvfd.2013.9959
10. Kılıc A, Kalender H, Eroksuz H, Muz A, Tasdemir B: Identification by culture, PCR and immunohistochemistry of mycoplasmas and their molecular typing in sheep and lamb lungs with pneumonia in Eastern Turkey. Trop Anim Health Prod, 45, 1525-1531, 2013.
11. Kahya S, Temelli S, Eyigor A, Carli KT: Real-Time PCR, bacteriology and serology for the diagnosis of Mycoplasma gallisepticum in chicken breeder focks. Vet Microbiol, 144 (3-4): 319-324, 2010.
12. Cetinkaya B, Kalın R, Karahan M, Atıl E, Manso-Silvan L, Thiaucourt F: Detection of contagious caprine pleuropneumonia in East Turkey. Rev Sci Tech , 28, 1037-1044, 2009.
13. Çetinkaya B, Karahan M, Kalın R, Atıl E: Türkiyenin doğusundaki ruminant mikoplazmalarının biyoçeşitliliği: Aşı ve kontrol stratejileri için uygulamalar. IX. Ulusal Veteriner Mikrobiyoloji Kongresi, 05-07 Ekim, Lefkoşa, Kuzey Kıbrıs Türk Cumhuriyeti, 9-12, 2010.
14. Özdemir Ü, Türkaslan J: Bulaşıcı Agalaksi salgınlarından izole edilen Mycoplasma türleri. Pendik Vet Mikrobiol Derg , 34, 1-2, 2003.
15. Önat K, Temizel EM, Göçmen H, Mecitoğlu Z, Kasap S, Ülgen M: Mycoplasma agalactiae ile doğal enfekte bir keçi işletmesinde Tylosinin etkilerinin değerlendirilmesi. Uludağ Üniv Vet Fak Derg, 30, 13-16, 2011.
16. Nicholas R, Baker S: Recovery of Mycoplasmas from animals. In, Miles R, Nicholas R (Eds): Methods in Molecular Medicine, Mycoplasma Protocols. 37-50, Humana Press, Totowa, New Jersey, 1998.
17. Marenda MS, Sagne E, Poumarat F, Citti C: Suppression subtractive hybridization as a basis to assess Mycoplasma agalactiae and Mycoplasma bovis genomic diversity and species-specific sequences. Microbiology, 151, 475-489, 2005.
18. Abtin AR, Pourbakhsh SA, Ashtari A, Bayatzadeh MA, Barani SM, Ahangaran S: Isolation and identification of Mycoplasma agalactiae by culture and polymerase chain reaction (PCR) from sheep of Qom province. Arch Razi Inst, 68 (1) :11-16, 2013.
19. De la Fe C, Assuncao P, Antunes T, Rosales RS, Poveda JB: Microbiological survey for Mycoplasma spp. in a contagious agalactia endemic area. The Vet J, 170, 257-259, 2005.
20. Ongor H, Kalin R, Acik MN: Detection of Mycoplasma ovipneumoniae from goats with nasal discharge by culture and polymerase chain reaction. Pak Vet J, 31, 244-248, 2011.
21. Goltz JP, Rosendal S, McCraw BM, Ruhnke HL: Experimental studies on the pathogenicity of Mycoplasma ovipneumoniae and Mycoplasma arginini fort he respiratory tract of goats. Can J Vet Res, 50, 59-67, 1986.
22. Lin YC, Miles RJ, Nicholas RAJ, Kelly DP, Wood AP: Isolation and immunological detection of Mycoplasma ovipneumoniae in sheep with atypical pneumonia, and lack of a role for Mycoplasma arginini. Res Vet Sci, 84, 367-373, 2008.
23. İzgür M: Mycoplasma, Ureaplasma, Acheloplasma, Spiroplasma ve Erysipelothrix infeksiyonları. In, Aydın N, Paracıkoğlu J (Eds): Veteriner Mikrobiyoloji (Bakteriyel Hastalıklar). 293-304, İlke-Emek Yayınları Ankara, 2006.
24. Walker RL: Mollicutes. In, Hirsh DC, Zee YC (Eds): Veterinary Microbiolgy. 3 rd ed., 165-172, Blackwell Publishing, Iowa, 1999.
25. Poveda JB: Biochemical charactristics in Mycoplasma ıdentification. In , Miles RJ, Nicholas RAJ (Eds): Methods in Molecular Biology, Vol. 104: Mycoplasma Protocols. 69-78, Humana Press Inc., Totowa, NJ, 1998.
26. Johansson KE, Heldtander MUK, Pettersson B: Characterization of Mycoplasmas by PCR and sequence analysis with universal 16S rDNA primers. In, Miles RJ, Nicholas RAJ (Eds): Methods in Molecular Medicine, Vol 104, Mycoplasma Protocols. 145-163, Humana Press, Totowa, New Jersey, 1998.
27. Tola S, Angio A, Rocchigiani A, Idini G, Manunta D, Galleri G, Leori G: Detection of Mycoplasma agalactiae in sheep milk samples by polymerase chain reaction. Vet Microbiol, 54, 17-22,1997.
28. Bashiruddin JB: Extraction of DNA from Mycoplasmas. In, Miles RJ, Nicholas RAJ (Eds): Methods in Molecular Medicine,Vol 104, Mycoplasma Protocols. 141-144, Humana Press, Totowa, New Jersey, 1998.
29. Subramaniam S, Bergoiner D,Poumarat F, Capaul S,Schlatter Y, Nicolet J, Frey J: Species identification of Mycoplasma bovis and Mycoplasma agalactiae based on the uvrC genes by PCR. Mol and Cell Probes, 12, 161-169,1998.
30. Bashiruddin JB, Frey J, Konigsson MH, Johansson KE, Hotzel H, Diller R, Santis DP, Botelho A, Ayling RD, Nicholas RAJ, Thiaucourt F, Sachse K: Evaluation of PCR systems for the identidication and differentiation of Mycoplasma agalactiae and Mycoplasma bovis : A collaborative trial. Vet J, 169, 268-275, 2005.