Köpeklerde erişkin Taenia hydatigena antijenine karşı antijenik spesifitenin SDS-PAGE ve western blot yöntemiyle araştırılması

Köpek, kurt ve diğer yabani karnivorlarm ince bağırsaklarında paraziti enen ve oldukça kozmopolit bir yayılışa salıip olan Taenia hydatigena'mn karnivorlarda teşhisi oldukça zor olup, yumurtaları Taeniidae ailesine bağlı diğer türlerin yumurtalanyla karışmaktadır. Bu çalışmada deneysel yolla enfekte edilen ile kontrol grubu köpek yavrularından elde edilen serumlar ve olgun T.hydatigena halkalarından hazırlanan antijen kullanılmıştır. Antijendeki proteinlerin molekül büyüklüklerinin belirlenmesi için antijenin SDS-PAGE yöntemiyle elektroforezi yapılmıştır. SDS-PAGE yöntemi ile separe edilen proteinler Western blot metoduyla nitfoselüloz membranlara transfer edilip, köpek serumları (deneysel enfekte ve kontrol grubu) ve ayrıca hazır ticari non-enfekte köpek serumu test edilmiş ve membranlarda açığa çıkan protein bantlanndan hangilerinin deneme grubu hayvanlar için spesifik olduğunu belirlemek için elde edilen bulgular diğer bantlarla karşılaştınlmıştır. Bu bulgulara göre Western blot yönteminde köpeklerde T.hydatigena'nın tanısında kullanılabilecek spesifik bantların molekül ağırlıklarının 24 ve 84 kDa olduğu tespit edilmiştir.

Anahtar Kelimeler:

western blotting, ince bağırsak, parazitler, köpek, tanı teknikleri, Taenia hydatigena, SDS-PAGE

Investigation of antigenic specificity against somatic Taenia hydatigena antigen in dogs by SDS-PAGE and western blotting

Taenia hydatigena occurs in the small intestine of dogs, wolves and other wild carnivores and it is cosmopolitan in distribution. The diagnosis of this cestode is almost impossible via fecal examination in carnivores. Because the egg of this parasite is very similar to other species of Taeniidae family, which causes confusion in diagnosis. In this study the sera were obtained from the experimentally infected dogs and Control group dogs. Antigen was prepared from the T.hydatigena proglottids. The antigen was studied with SDS-PAGE to determine protein bands. These proteins were transferred to nitrocellulose membranes by the method of Western blotting. The dog sera and also commercial non-infected dog serum were tested on these nitrocellulose membranes. After that the results from the sera of experimental group were compared to the results of sera from Control group and non-infected dog serum to determine specific bands for this parasite. According to the results, the bands of 24 and 84 kDa are determined to be specific proteins in the diagnosis of T.hydatigena in dogs.

Keywords:

western blotting, small intestine, parasites, dogs, diagnostic techniques, Taenia hydatigena, SDS-PAGE,

PDF

___

1.Güralp N: Helmintoloji, ikinci baskı. Ankara Üniv Vet Fak Yayınevi, No: 368,1981.
2.Soulsby EJL: Helminths, Arthropods and Protozoa of Domesticated Animals. Bailliere Tindall, London. 113-114, 1982.
3.Mimioğlu MM, Güralp N, Tolgay N, Sayın F: Ankara köpeklerinde görülen parazit türleri ve bunların yayılış nisbeti. Ankara Üniv Vet Fak Derg, 6: 53-68, 1960.
4.Pamukçu AM, Ertürk E: 1933 ve 1960 yılları arasında Ankara ve yöresinde köpeklerde görülen hastalıklara toplu bir bakış. Ankara, Üniv Vet Fak Derg, 8: 323-346,1961.
5.Doğanay A: Ankara sokak köpeklerinde görülen helmint türleri, bunların yayılışı ve halk sağlığı yönünden önemi. Ankara Üniv Vet Fak Derg, 30: 550-561, 1983.
6.Heath DD, Lawrence ŞB, Glennie A, Twaalhoven H: The use of excretory and secretory antigens of the scolex of Taenia övis for the serodiagnosis of infections in dogs. J Parasitol, 71: 192-199,1985.
7.Deplazes P, Gpttstein B, Stingelin Y, Eckert J: Detection of Taenia hydatigena copro-antigens by ELISA in dogs. Vet Parasitol, 3&: 91-103,1990.
8.Burgu A, Doğanay A, Gönenç B, Sarimehmetoğlu HO, Kalinbacak F: Analysis of hydatid cysts from sheep by SDS-PAGE and determination of spesific antigens in protein structure by Western blotting. 7' J Vet Anim Sci, 24: 493-501, 2000.
9.Sambrook J, Fritsch EF, Manniatis T: Molecular cloning: A laboratory manual, 15.section, Cold Spring, Harbor, Newyork, p. 18.47-18.76,1989.
10.Heath DD, Parmeter SN, Osborne PJ: An attempt to immunize dogs against Taenia hydatigena. Res Vet Sci, 29:388-389,1980
11.Jenkins DJ, Rickard MD: Specific antibody responses in dogs experimentally infected with E.granulosus. Am J Trop Med Hyg, 35: 345-349,1986.
12.Yong WK,. Heath DDY Comparison of cestode antigens in an enzyme-linked immunosorbent assay for the diagnosis of Echinococcus granulosus, Taenia hydatigena, and T.ovis infections in sheep. Res Vet Sci,36: 24-31, 1984.
13.Jacobs HJ, Moriarty KM, Charleston WAG: Resistance against Taenia hydatigena in sheep after passive transfer of serum or colostrum. Parasit Immunol, 16: 351-359,1994.
14.Berezhko VK, Romanenko LN: Antigenic affinity of cestodes in the genus taenia. Parazitologiia, 23:153-158,1989.
15.Ko RC, Ng TF: Evaluation of e/s products of larval Taenia solium as diagnostic antigens for porcine and human cysticercosis. J Helminthol, 72:147-154,1998.
16.Jenkins DJ, Rickard MD: Haemotological and serological data from dogs raised worm-free and monospesifically infected with helminths. Aust VetJ, 61: 309-311, 1984.
17.Jenkins DJ, Rickard MD: Specific antibody responses to Taenia hydatigena, T.pisiformis, and Echinococcus granulosus infection in dogs. Aust Vet J, 62: 72-78,1985.
18.Jenkins Dj, Rickard MD: Specificity of scolex and oncosphere antigens for the serological diagnosis of taeniid cestode infections in dogs. Aust Vet J, 29: 1271-1272,1986b.
19.Ralston MJ, Heath DD: A defined antigen for the serodiagnosis of Taenia ovis infections in dogs. J Parasitol, 81: 422-428,1995.