Sığır dalak doku arginazının bazı kinetik özellikleri

Bu çalışmada sığır dalak doku arginazının bazı kinetik özelliklerini incelenmiştir. Çalışmada kullanılan dalak dokuları Elazığ’daki Elkas kesimevinden temin edilmiştir. Arginaz aktivitesini ölçmede tiyosemikarbazid-diasetilmonoksim üre (TDMU) metodu kullanılmıştır. Protein Lowry ve arkadaşlarının metoduna göre ölçülmüştür. Preinkübasyon sıcaklığı, preinkübasyon süresi, inkübasyon süresi ve optimal pH’ nın sırasıyla $62 ^circ C$, 15 dakika, 10 dakika ve 9.7 olduğu tespit edilmiştir. Ayrıca sığır dalak doku arginazının çeşitli metal iyonlarına karşı duyarlılığı tespit edilmiş ve metal iyonları ($Mn^{+2}$, $Cu^{+2}$, $Mg^{+2}$, $Ba^{+2}$, $Fe^{+3}$, $Ag^{+2}$, $Cr^{+3}$, $Sn^{+2}$, $Hg^{+2}$, $Pb^{+2}$, $Co^{+2}$, $Ni^{+2}$, $Zn^{+2}$, $Cd^{+2}$, $Li^{+1}$, $K^{+1}$, $Al^{+3}$, $Mo^{+6}$, $Na^{+1}$ ve $Ca^{+2}$ ) içinde enzim aktivitesi üzerine en etkili metalin $Mn^{+2}$ olduğu bulunmuştur. Enzim 2 mM’ lık $MnCl_2$ konsantrasyonunda en yüksek aktiviteyi göstermiştir. Enzim aktivasyonu için $Mn^{+2}$ iyonlarının ve preinkübasyonun gerekli olduğu görülmüştür. $Pb^{+2}$ ve $Ag^{+2}$ iyonları varlığında enzim hiç aktivite göstermemiştir. Enzimin substrata olan ilgisi Michaelis -Menten grafiğine göre değerlendirilmiş ve Km değeri 5 mM olarak bulunmuştur.

Some kinetic properties of arginase in bovine spleen tissue

In this study, some kinetic properties of arginase in bovine spleen tissue were examined. The spleen tissues used in the present study were obtained from the Elkas sloughterhause in Elazıg. The thiosemicarbazide- diacetylmonoxime urea (TDMU) method was used to measure arginase activity. Protein was measured by the method of Lowry et al. Preincubation temperature, preincubation period, incubation period and optimal pH were determined to be $62^circ C$, 15 min, 10 min and 9.7 respectively. Furthermore, it was found that arginase in bovine spleen tissue was sensitive to different metal ions. It was found that the most effective was $Mn^{+2}$ from among $Mn^{+2}$, $Cu^{+2}$, $Mg^{+2}$, $Ba^{+2}$, $Fe^{+3}$, $Ag^{+2}$, $Cr^{+3}$, $Sn^{+2}$, $Hg^{+2}$, $Pb^{+2}$, $Co^{+2}$, $Ni^{+2}$, $Zn^{+2}$, $Cd^{+2}$, $Li^{+1}$, $K^{+1}$, $Al^{+3}$, $Mo^{+6}$, $Na^{+1}$ and $Ca^{+2}$ metal ions. Arginase showed the highest activity in a 2 mM MnCl2 concentration. Manganese ions and preincubation were necessary for the activation of the enzyme. The enzyme has no activity in presence of Pb and Ag ions. The relationship with the enzyme substrate was evaluated according to Michaelis- Menten and the Km value was 5 mM.

PDF

___

1. Jackson JM., Beaudet AL., O’ Brien WE.: Mammalian urea cycle enzymes. Ann. Rev. Genet. 1986; 20: 431-464.
2. Aminleri M., Vaseghi T.: Arginase Distribution in Tissue of Domestic Animals. Comp Biochem Physiol 1992;103: 385- 389.
3. Özçelik M., Özdemir N.: Koyun Meme Doku Arginazının Bazı Biyokimyasal Özellikleri. Turk J. Vet. Anim. Sci. 2003; 27: 719-725.
4. Erişir M.: Sığır Rumen Doku Arginazının Bazı Biyokimyasal Özellikleri. Doktora Tezi, Elazığ: Fırat Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, 1997.
5. Özdemir N., : M. Benedeni Arginazının Bazı Özellikleri. Doktora Tezi, Elazığ: Fırat Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, 1990.
6. İlhan N.: İnsan Tiroid Doku Arginazının Kinetik Özellikleri. Doktora Tezi, Elazığ: Fırat Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, 1992.
7. Gürsu M.F. Çeşitli Türlerin Humor Vitreuslarında Üre ve KaynaklarınınAraştırılması. Doktora Tezi, Elazığ: Fırat Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, 1993.
8. Konarska L, Tomaszewski L, Colombo JP, Terheggen HG. Human salivary arginase and its deficiency in argininaemia. J Clin Chem Clin Biochem. 1985; 23(6): 337-42.
9. Geyer J.W., Dabich D.: Rapid Method for Determination of Arginase Activity in Tissue Homogenates. Anal. Biochem. 1971; 39: 412-417.
10. Lowry O.H., Rosenbrough N.J., Farr A.L., and Randall R.J.: Protein Measurements with the Folin Phenol Reagent. J. Biol. Chem. 1951; 193:265-275.
11. Mohammed S. M., Greenberg D.M.: Liver Arginase I. Preperation of Extracts of High Potency, Chemical Properties, Activation, İnhibition and pH Activity. Arch. Biochem. Biophys. 1945; 8: 349-357.
12. Colombo J., P., Konarska L.: Arginase; In : Bergmayer Grabı M. (Eds). Methods of enzymatic analysis. 3 rd Ed.Weinheim Vertag Chemie. 1984: 285-294.
13. Erisir M., Ercel E., Yılmaz S., Ozan S.:Evaluation of optimal conditions for arginase activity in streptozotocin induced diabetic rats. Vet. Med. – Czech, 50, 2005; (2): 69–76.
14. Halifeoğlu İ.: İnsan Karaciğer, Eritrosit ve Uterus Doku Arginazının Kinetik Özellikleri. Doktora Tezi, Elazığ: Fırat Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü., 1993.
15. Spector E.B., Rice S.C.H., Moedjono S., Bernard B., Cederbaum S.D.: Biochemical Properties of Arginase İn Human Adult and Fetal Tissues. Biochem. Med. 1982; 28: 165-175.
16. Muszynska G. Immobilization of rat liver arginase. C.I Biospecific Chromatography. Protides of the Biological Fluids 23 RD. Colloguim. Oxford and New York. Pergamon Press, 1976: 633-637.
17. lhan N, Gülen Ş: Tiroid Arginaz Enzim Aktivitesinin Farklı Metal İyonları Varlığında Isıya Karşı Stabilitesi. Biyokimya Dergisi 1993; 18: 59-67.
18- Ozan S., Gürsu M.F., Gülen Ş.: Kısmen Arıtılmış Moniezia Expensa Arginazının Bazı Özellikleri. Tr. J. Vet. Anim. Sci. 1993; 17:245-250.