Acıpayam koyunlarında karbonik anhidraz 1 (CA1) ve malik enzim (ME)'in nişasta jel elektroforezi ile araştırılması

Amaç: Acıpayam ırkı koyunların genetik yapılarını belirlemek için iki enzim lokusu; karbonik anhidraz (CA 1] ve malik enzim (ME] nişasta jel elektroforezi ile incelemektir.Gereç ve Yöntem: Araştırmada "Denizli Acıpayam Devlet Üretme Çiftliği"nden 50 adet koyundan kan alındı. Elde edilen hemolizatlar elektroforez işlemleri uygulanarak incelendi. Her iki enzim için Tris-EDTA-Borat pH:8.6 tamponu kullanıldı. Elektroforez sonrası boyamada CA 1 için MUA, aseton, agar noble, fosfat tamponu pH:6.5 ve ME için NADP, MTT, PMS, DL Malik asit, MgC12, NaOH, Agar Noble, Tris-HCl pH:8.0 tamponu kullanıldı. Bantlar CA 1 için ultraviyole ışıkta, ME için ise uygun ışık ortamında gözlendi.Bulgular: CA 1 enzimi lokusları yönünden koyunlarda po-limorfizm tespit edilmedi ve bütün numunelerin aynı bantlara sahip homozigot bireyler olduğu görüldü. ME lokusu yönünden populasyon içi polimorfizm gözlendiği, F, FS ve S bantlarına sahip olduğu, ME lokusunun F ve S allel frekans değerleri arasındaki farkın önemsiz olduğu (p>0.05) ve al-lellerin Hardy-Weinberg dengesinde olduğu belirlendi..Öneri: Bu çalışmayla Acıpayam koyunlarında malik enzim yönünden polimorfizm görülürken, CA 1 yönünden polimorfizm görülmediği belirlenmiş ancak başka enzimler açısından da polimorfizm gösterip göstermediğinin araştırılması gerektiği sonucuna varılmıştır.

Investigation of carbonic anhi-drase 1 (CA 1] and malic enzyme (ME) in Acipayam sheep by using starch gel electrophoresis

Aim: For the determination of genetic structure of Aci-payam Sheep, two enzyme loci were studied by using starch gel electrophoresis; carbonic anhidrase 1 (CA 1) and malic enzyme (ME).Materials and Methods: In this study, blood samples were taken from 50 sheeps in "Denizli Acıpayam State Farm". Hemolysates were examined by electrophoresis. Tris-EDTA-Borat pH:8.6 buffers were used for both of the enzymes. In staining after electrophoresis, MUA, acetone, agar noble, phosphate buffer pH:6.5 was used for carbonic anhidrase 1. NADP, MTT, PMS, DL Malic acid, MgC12, NaOH, agar noble, Tris-HCl pH:8.0 buffer was used for malic enzyme. Bands were observed in ultraviolet lamps for CA 1 and appropriate light condition for ME.Results: No polymorphism was observed for the CA 1 enzyme. All sheep were found to be homozygote for the same allele. For ME loci, population were observed polymorphism, having F, FS and S bands, the difference between F and S bands in ME loci were unimportant (p>0.05) and allels were determined in the Hardy-Weinberg equilibrium.Conclusion: In this study, ME polymorphism was observed but no polymorphism was determined for CA 1 locus. It was concluded that it is necessary to investigate other enzymes in terms of polymorphism.

PDF

___

Arbeiter K, Winding M, 1977. Zur behandlung der Lactatio Agar NS, Robert J, Vans JV, 1970. Breed differences in sheep erythrocyte carbonic anhydrase activity. Comp Biochem Physiol, 35, 639-646.
Altunok V, Nizamlıoğlu M, Bulut Z, 2007. Ankara keçilerinin genetik yapılarının nişasta jel elektro forezi yöntemiyle araştırılması. Yet Bil Derg, 21, 67-72.
Asal S, Dellal G, Kocabaş Ş, 1996. Haemoglobin and aryles-terase types in Akkaraman and Anatolian merino breeds of sheep. Türk J Vet Anim Sci, 20, 215-217.
Baker CM, Mariwell C, 1977. Heterozygosity of the Sheep: polymorphism of "Malic Enzyme" isocitrate dehidroge-nase (NADP+), Catalase and esterase. Aust J Biol Sci, 30, 127-140.
Bering CL, Kuhns JF, Rowlet R, 1998. Purification of bovine carbonic anhydrase by affinity chromatography. J Chem Educ, 75,1021-1024.
Bhattacharyya SP, Saha N, 1984. Mitochondrial malic enzyme polymorphism among different ethnic groups in Singapore. Hum Hered, 34, 393-395.
Buis RC, Tucker EM, 1983. Relationship between rare breeds of sheep in the Netherlands as based on blood-typing. Anim Blood Grps Biochem Genet, 14,17-26.
Casati MZ, Gandini GC, Leone P, Rognoni G, 1988. Genetic relationship among four sheep breeds of the Italian alpine ark. J Anim Breed Genet, 105,135-142.
Casati MZ, Gandini GC, Leone P, 1990. Genetic variation and distances of five Italian native sheep breeds. Anim Genet, 21,87-92.
Clarke SW, Tucker EM, Osterhoff AR, 1989. Blood groups and biochemical polymorphism in the Namaqua sheep breed. Anim Genet, 20,279-286.
Deza C, Perez GT, Gardenal CN, Varela L, Villar M, Rubiales S, Barioglio C, 2000. Protein polymorphism in native goats from central Argentina. Small Rum Res, 35,195-201.
Kaya F, 1990. Acıpayam koyunu. Hayvansal Üretim Dergisi, 33,91-92.
Koçak Ç, Kaymakçı M, Demirören E, 1990. Ege Üniversitesi Ziraat Fakültesince yetiştirilen koyun tipleri. Hayvansal Üretim Dergisi, 33,23-32.
Manchenko GP, 2003. Handbook of Detection of Enzymes on Electrophoretic Gels, Second Edition, CRC Pres LLC, Florida, USA.
Manwell C, Baker CMA, 1977a. Ammotragus lervia; Barbary sheep or Barbary goat. Comp Biochem Physiol, 58, 267-271.
Manwell C, Baker CMA, 1977b. Genetic distance between the Australian merino and Poll Dorset sheep. Genet Res, 29,239-253.
Menrad M, Stier CH, Gelderman H, Gall CF, 2002. A study on the Changthangi Pashmina and the Bakerwali goat breeds in Kashmir I. Analysis of blood protein polymorphisms and genetic variability within and between the populations. Small Rum Res, 43, 3-14.
Missohou A, Nguyen TC, Sow R, Gueye A, 1999. Blood polymorphism in West African breeds of sheep. Trop Anim Health Pro, 31,175-179.
Morera L, Barbancho M, Rodero A, 1983. Geneticpolymor-phism in Spanish merino sheep. Anim Blood Grps Biochem Genet, 14, 77-82.
Nizamlıoğlu M, Altunok V, Togan İ, Ergüven A, Kurtoğlu F, Tekin ME, Ergin A, Düzgün H, 2008. Konya Hayvancılık Merkez Araştırma Enstitüsü'ndeki yerli ve yabancı koyun ırklarında biyokimyasal polimorfizm ile bazı verim özellikleri arasındaki ilişkilerin araştırılması. Vet Bil Derg, 24,41-47.
Ordas JG, Primitivo F, 1983. A new allele at the red cell carbonic anhydrase locus in sheep. Anim Blood Grps Biochem Genet, 14, 233-234.
Ordas }G, Primitivo FS, 1986. Genetic variation in blood proteins within and between Spanish dairy sheep breeds. Anim Genet, 17, 255-266.
Rasero R, Stasio D, Giaccone P, Facello C, 1989. Malic enzyme polymorphism in goat. Anim Genet, 20, 80.
Rodero A, Haba MR, Llanes D, Moreno A, 1990. Evolution of a population of Spanish merino with genetic marker. Arch Zootec, 39,187-196.
Rodero E, Haba MR, Rodero A, 1997. Genetic study of Andalusia's ovine and caprine breeds. Anim Breed Genet,114,143-161.
Soysal Mİ, 2000. Genetik, Geliştirilmiş ve yenilenmiş 3. Baskı, TÜ Tekirdağ Ziraat Fakültesi Yayın No 74, Ders notu 135.
Spiro TG, 1991. Zinc Enzymes, Krieger Published Company, Florida, USA.
Stasio DL, 1997. Biochemical Genetics, in: The Genetics of Sheep, Eds; Piper L, Ruvinsky A, CAB International, UK Press Cambridge, USA.
Tucker EM, Clarke SW, 1980. Comparative aspects of biochemical polymorphism in the blood of caprinae species and their hybrids. Anim Blood Grps Biochem Genet, 11, 163-183.
Voegele RT, Mitsch MJ, Finan TM, 1999. Characterization of two members of a novel malic enzyme class. Biochim Biophys Acta, 1432,275-285.
Yaman K, Tucker EM, 1981."Malic enzyme" polymorphism in sheep erythrocytes. Anim Blood Grps Biochem Genet, 12,215-218.