Mehtap NİSARİ, Saim ÖZDAMAR, Tolga ERTEKİN, Gözde Özge ÖNDER

Ehrlich Solid Tümörlerinde Kanser Kök Hücre Varlığının İmmunohistokimyasal Olarak Değerlendirilmesi

Amaç: Tümör gelişimi ve devamlılığında kanser hücrelerinin kendi başlarına hareket etmelerinin yanı sıra kanser kök hücrelerinin kanseri oluşturduğu, aynı zamanda kanserin relapsı ve metastazında rolleri olduğu düşünülmektedir. Çalışmamızda, meme kanseri kökenli olduğu bilinen ve verildiği farede tümör oluşturabilen Ehrlich asit tümörünün meme kanser kök hücre yüzey belirteçlerine sahip olup olmadığı ve niş oluşturup oluşturmadığı belirlenmesi amaçlanmıştır.Gereç ve Yöntemler: Çalışmada deneysel kanser modeli oluşturmak için EAT hücreleri 13 adet Balb/C farenin ense bölgesine subkutan olarak enjekte edilerek solid tümör gelişimi sağlandı. Deneyin 14. gününde anestezi altında tümör dokuları alındı. Dokulardan alınan kesitlere Hematoksilen&Eozin ve Masson’un üçlü boyaması uygulandı. Ayrıca dokular meme kanseri kök hücresi belirteçleri olan CD44 ve CD24 ekspresyonu ile birlikte niş belirteci olan periostin ekspresyonunu belirlemek için immunohistokimyasal olarak değerlendirildi.Bulgular: Deneklere eşit sayıda hücre verilmesine rağmen denekler arasında tümör boyutları, hacimleri ve denek ağırlıklarının farklı olduğu gözlendi. Dokularda CD44’ün ve CD24’ün hem hücre sitoplazmasında hem de hücre membranında, periostin’in ekstraselüler matriksde eksprese olduğu belirlendi. Sonuç: Hem sitoplazmik hem de membranda CD44 ekspresyonunun anormal olabileceği nedeniyle kanser kök hücresi varlığıyla ilgili bilgi elde etmemizi sınırlandırmıştır. Ayrıca hücrelerin CD24+ oluşu olgun kanser hücrelerinin tümör kitlesi içinde bulunduğunu göstermiştir. Bununla birlikte EAT, periostin ekspresyonunu artırmak yoluyla kendi nişini oluşturma yeteneğine sahip olduğunu göstermiştir.

Immunohistochemical Investigation of Availability of Cancer Stem Cells in Ehrlich Solid Tumors

Objective: As well as cancer cells act their own in tumor growth and maintaining, it is thought that cancer stem cells generate cancer and play an important role in cancer relapse and metastasis. It’s aimed to determine whether Ehrlich acid carcinoma(EAC), which is known to have breast cancer origin and can form a tumor in the mouse to which it is given, has breast cancer stem cell markers and whether they generate its own niche. Material and Methods: To create an experimental cancer model, EAC cells were injected subcutaneously into the neck of 13 Balb/C mice and solid tumor was developed. Tumor tissues were removed under anesthesia on the 14th day of the experiment. Tumor sections were stained Hematoxylin&Eosin and Masson’s Trichrome. Then, tissues were evaluated immunohistochemically to determine the expression of breast cancer stem cell markers, CD44, CD24, and the expression of the niche marker, periostin. Results: Although the same numbers of EAC cells were injected to animal hosts, solid tumor’s size and volume and animal host’s weight were different from each other. CD44 and CD24 staining were detected both cytoplasm and membrane of tumor cells, periostin was expressed in extracellular matrix in solid tumor. Conclusion: It limited to obtain information about the presence of cancer stem cells, since CD44 expression in both cytoplasmic and membrane may be abnormal. In addition, CD24+ cells showed that mature cancer cells are within the tumor mass. However, EAC has shown its ability to form its own niche by increasing the expression of periostin.

PDF

___

1. Somunoğlu S. Meme kanseri: belirtileri ve erken tanıda kullanılan tarama yöntemleri. Fırat Sağlık Hizmetleri Dergisi. 2009; 4: 103-22.
2. Jemal A, Siegel R, Xu J, Ward E. Cancer Statistics. CA Cancer J Clin. 2010; 60(5): 277-300.
3. Özmen V. Dünya’da ve Türkiye’de meme kanseri. Meme Sağlığı Dergisi. 2008; 4: 7-9.
4. Carke MF. Cancer stem cells-perspectives on current status and future directions: AACR workshop on cancer stem cells. Cancer Res. 2006; 66(19): 9339-44.
5. Yu Z, Pestell TG, Lisanti MP, Pestell RG. Cancer stem cells. The International Journal of Biochemistry & Cell Biology. 2012; 44(12): 2144-51.
6. Türkçapar N, Özden A. Tümör markırları ve klinik önemi. Güncel Gastroenteroloji. 2005; 9(4): 271-81.
7. Al-Hajj M, Wicha MS, Benito-Hernandez A, Morrison SJ, Clarke MF. Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells. Proc Natl Acad Sci. 2003; 100(7): 3983-88.
8. Zhang Y, Liu D, Chen X, Li J, Li L, Bian Z, et al. Secreted monocytic miR-150 enhances targeted endothelial cell migration. Molecular Cell. 2010; 39(1): 133-44.
9. Malanchi I, Santamaria-Martinez A, Susanto E, Peng H, Lehr HA, Delaloye JF, et al. Interactions between cancer stem cells and their niche govern metastatic colonization. Nature. 2012; 481(7379): 85- 9.
10. Zeybek Ü. Kanser araştırmaları ve deneysel modeller. Deneysel Tıp Araştırma Enstitüsü Dergisi. 2013; 2(5): 1-12.
11. Zeybek Ü. Deneysel kanser modelleri. Kalıtsal Hastalıklara Moleküler Tıp Açısından Bakış Sempozyumu;2003;s 283-320.
12. Aktaş E. Ehrlich Asit Sıvısının L- Hücrelerinin Çoğalma Hızına Etkisi [Yüksek Lisans Tezi]. İstanbul Üniversitesi; 1996.
13. Taşkın Eİ. Ehrlich ascites tümörü ile Balb/c ırkı farelerde oluşturulmuş solid tümör modelinde curcuminin apoptoz üzerine etkileri[Doktora Tezi]. İstanbul Üniversitesi; 2002.
14. Okay HG. Deneysel EAT oluşturulan fare karaciğer plazmasında nitrik oksit metabolizmasının incelenmesi[Yüksek Lisans Tezi). İstanbul Üniversitesi; 1998.
15. Zeybek Ü. En uygun Ehrlich ascites tümör modellerinin farklı soy ve cinsiyetteki farelerde gösterilmesi [Yüksek Lisans Tezi]. İstanbul Üniversitesi; 1996.
16. O’Reilly M, Boehm T, Shing Y, Fukai N, Vasios G, Lane WS, et al. Endostatin: An endogenous inhibitor of angiogenesis and tumor growth. Cell. 1997; 88(2): 277-85.
17. Yay A, Onder GO, Ozdamar S, Bahadir A, Aytekin M, Baran M. The effects of leptin on rat brain development; an experimental study. Int J Pept Res Ther. 2019; 25: 1605-16.
18. Yay A, Onses MS, Sahmetlioglu E, Ceyhan A, Pekdemir S, Onder GO, et al. Raman spectroscopy: A novel experimental approach to evaluating cisplatin induced tissue damage. Talanta. 2020; 207: 120343
19. Kayaalp SO. Kanser kemoterapisinin esasları ve antineoplastik İlaçlar. In: Rasyonel Tedavi Yönünden Tıbbi Farmakoloji.8.basım, cilt 1. Ankara: Feryal Matbaacılık;1998.
20. Ekinci G. Katı Ehrlich Ascites Tümörünün büyüme kinetiği. [Yüksek Lisans Tezi[. İstanbul: İstanbul Üniversitesi; 2000.
21. Kabel AM. Effect of combination between methotrexate and histone deacetylase ınhibitors on transplantable tumor model. American Journal of Medicine Studies. 2014; 2(1): 12-8.
22. Wang Z, Shi Q, Wang Z, Gu Y, Shen Y, Sun M, et. al. Clinicopathological correlation of cancer stem cell markers CD44, CD24, VEGF and HIF-1α in ductal carcinoma in situ and invasive ductal carcinoma of breast: An immunohistochemistry-based pilot study. Pathology-Research and Practise. 2011; 207(8): 505- 13.
23.Ricardo S, Vieira AF, Gerhard R, Leitao D, Pinto R, Cameselle-Teijeiro JF, et al. Breast cancer stem cell markers CD44, CD24 and ALDH1: expression distribution within intrinsic molecular subtype. J Clin Pathol. 2011; 64(11): 937-46.
24. Abraham BK, Fritz P, McClellan M, Hauptvogel P, Athelogou M, Brauch H. Prevalence of CD44+ CD24-/low cells in breast cancer may not be associated with clinical outcome but may favor distant metastasis. Clinical Cancer Research. 2005; 11: 1154- 9.
25. Saegusa M, Hashimura M, Machida D, Okayasu I. Downregulation of CD44 standard and variant isoforms during the development and progression of uterine cervical tumours. J Pathol. 1999; 187(2): 173- 83.
26.Berner HS, Nesland JM. Expression of CD44 isoforms in infiltrating lobular carcinoma of the breast. Breast Cancer Res Treat. 2001; 65(1): 23-9.
27.Regauer S, Ott A, Berghold A, Beham A. CD44 expression in sinonasal melanomas: is loss of isoform expression associated with advanced tumour stage? J Pathol. 1999; 187(2); 184-90.
28.Beham-Schmid C, Heider KH, Hoefler G, Zatloukal K. Expression of CD44 splice variant v10 in Hodgkin’s disease is associated with aggressive behaviour and high risk of relapse. J Pathol. 1998; 186(4): 383-9.
29.Berner HS, Suo Z, Risberg B, Villman K, Karlsson MG, Nesland JM. Clinicopathological associations of CD44 mRNA and protein expression in primary breast carcinomas. Histopathology. 2003; 42(6): 546- 54.
30. Aigner S, Sthoeger Z, Fogel M, Weber E, Zarn J, Ruppert M et al. CD24, a mucin type glycoprotein, is a ligand for P-selectin on human tumors. Blood. 1997; 89(9): 3385-95.
31. Aigner S, Ramos CL, Hafezi-Moghadam, Lawrence MB, Friederichs J, Altevogt P, et al. CD24 mediates rolling of breast carcinoma cells on P-selectin. Faseb J. 1998; 12(12): 1241-51.
32. Kristiansen G, Sammar M, Altevogt P. Tumour biological aspects of CD24, a mucin-like adhesion molecule. Journal of Molecular Histology. 2004; 35(3): 255-62.
33.Ishikawa F, Yoshida S, Saito Y, Hijikata A, Kitamura H, Tanaka S, et al. Chemotherapy-resistant human AML stem cells home to and engraft within the bonemarrow endosteal region. Nat Biotechnol. 2007; 25(11): 1315-21.
34. Gillan L, Matei D, Fishman DA, Gerbin CS, Karlan BY, Chang DD. Periostin secreted by epithelial ovarian carcinoma is ligand for αvβ3 and αvβ5 integrins and promotes cell motility. Cancer Research. 2002; 62(18): 5358-64.