Hamza AVCIOĞLU, Özgür KAYNAR, İbrahim BALKAYA

Koyun ve sığır orijinli hidatid kistlerin SDS-PAGE ve HPTLC ile protein ve lipid profillerinin analizi

Koyun ve sığır karaciğer ve akciğerlerinden alınan kistlere ait kist sıvısı, germinal membran, kız kesesi ve protoskoleksler homojenize edildikten sonra, protein ve lipid profillerini belirlemek için SDS-PAGE ve HPTLC analizleri gerçekleştirildi. HPTLC analizi sonucunda, membran yapılarda, genel olarak tüm membranların oluşumuna katılan başlıca üç lipid sınıfı (fosfolipid, serbest yağ asidi, kolesterol) görülürken, sıvılarda ise sadece fosfolipidlerin varlığı tespit edildi. Numunelerin SDS-PAGE analizi sonucunda ise, moleküler büyüklükleri 8-205 kDa arasında, sığırlara ait karaciğer germinal membranında 16, akciğer germinal membranında 19, akciğer kız kese germinal membranında 15, akciğer kız kesesi sıvısında 17, akciğer steril kist sıvısında 4 adet, koyunlara ait akciğer germinal membranında 19, akciğer steril kist sıvısında 5 ve koyun akciğer fertil kist sıvısında 12 adet protein tespit edildi.

Analysis of protein and lipid profiles of hydatid cysts from sheep and cattle by SDS-PAGE and HPTLC

In sheep and cattle, the hydatid cyst fluids, cyst germinal membranes, cyst in the daughter sacs and microscopically identified protoscolexes taken from the livers and lungs, were analysed, following homogenisation according to the routine procedures, for illustrating the profiles of protein and lipid bands by using SDS-PAGE and HPTLC methods. According to the results of the HPTLC analyses, in the membrane structures, all three lipid classes (Phospholipid, Free Fatty Acids, Cholesterol), as contributing to the formation of all the membranes in general, were observed mainly, while presence of the phospholipid only was detected in the liquids. Following the SDS-PAGE analyses, various numbers of antigens, ranging from the 8 to 205 kDa molecular sizes, were detected, as; in bovine, germinal membrane of liver 16, in the germinal membrane of lung 19, in the daughter sac germinal membrane of lung 15, in the daughter sac fluid of lung 17, in the sterile cyst fluid of lung 4, while in ovine, in the germinal membrane of lung 19, in the sterile cyst fluid of lung 5 and, finally in the fertile cyst fluid of lung 12 antigens.

PDF

___

Barış İ., Şahin A., Bilir N., Kalyoncu AF., Emri AS., Akhan O., Barış B., Çopur AS., Selçuk ZT., 1989. Hidatik Kist Hastalığı ve Türkiye'deki Konumu. Türkiye Akciğer Hastalıkları Vakfı Yayını, No:1 Ankara.
Bulut H., Doymaz MZ., 2001. Blotlama Teknikleri ve Mikrobiyolojide Kullanımı. In: Durmaz R. (Ed.) Uygulamalı Moleküler Mikrobiyoloji. 2. baskı, 123-137.
Burgu A., Doğanay A., Güvenç B., Sarımehmetoğlu HO., Kalınbacak F., 2000. Analysis of fluids of hydatid cysts from sheep by SDS-PAGE and determination of specific antigens in protein structure by Western Blotting. Tr J Vet Anim Sci., 24, 463-500.
Dar FK., Alkarmi T., 1997. Public health aspects of cystic echinococcosis in the Arab countries. Acta Tropica., 67, 125-132.
Güralp N., 1981. Helmintoloji. İkinci baskı. Ankara Üniv. Vet. Fak. Yay., 368.
Hahn-Deinstrop E., 2007. Applied Thin-Layer Chromatography, 2. ed., WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim, Germany.
Hira PR., Bahr GM., Shweiki HM., Behbehani K., 1990. An enzymelinked immunosorbent assay using an arc 5 antigen for the diagnosis of cystic hydatid diseases. Ann Trop Med Parasitol., 84, 157-162.
Kanwar JR., Kaushik SP., Sawhney IM., Kamboj MS., Mehta SK., Vinayak VK., 1992. Specific antibodies in serum of patients with hydatidosis recognised by immunoblotting. J Med Microbiol., 36, 46-51.
Köksal F., Serin MS., Kekeç Y., Sadri YE., 1995. İnsan ve hayvan kökenli kist hidatik sıvılarının SDS-PAGE metoduyla analizi ve Western blot metodunun klinik önemi. T Parazitol Derg., 19, 221-229.
Morris DL., Richards KS., 1992. Hydatid Disease. Butterworth-Heinemann Ltd. Linarere House, Jordan Hill. Oxford OX2 8DP.
Musiani P., Piantelli M., Lauriola L., Arru E., Pozzuoli R., 1978. Echinococcus granulosus spesific quantification of the two most immunoreactive antigens in hydatid fluids. J Clin Pathol., 31, 475-478.
Rickard MD., Lightowlers MW., 1986. Immunodiagnosis of Hidatid Disease. In: Thompson RCA Ed., The Biology of Echinococcus and Hydatid Disease. George Allen and Unwin, London., 217-249.
Sharma SD., Mullenax J., Araujo FG., 1987. Westernblott analysis of the antigens of T.gondii recognized by human IgM antibodies. J Immunol., 131, 977-978.
Şaşmaz E., Hashempoor GR., Bahiar IH., Yuluğ N., 1995. Echinococcus granulosus 'un karşılaştırmalı antijenik analizi. T Parazitol Derg., 19, 83-87.
Şimşek S., Köroğlu E., 2004. Evaluation of enzymelinked immunosorbent assay (ELISA) and enzyme-linked immunoelectrotransfer blot (EITB) for immunodiagnosis of hydatid diseases in sheep. Acta Tropica., 92, 17-24.
Şimşek S., Ütük AE., Köroğlu E., 2006. Hidatik kist sıvısından antijen B (Agb)’nin kısmi purifikasyonu ve koyun hidatidosisinin tanısındaki etkinliği. Fırat Üniv Sağ Bil Derg., 20 (5), 337-340.
Reiner Westermeier R., 2005. Electrophoresis in Practice, 4. ed., WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim, Germany.