Çift Kabuklu Yumuşakçalarda Domoik Asit Miktarının Belirlenmesinde Referans Metot Olan HPLC Yönteminin Validasyonu

Bu çalışmada, çift kabuklu yumuşakçalarda domoik asit DA miktarının belirlenmesinde kullanılan ve Avrupa Birliği tarafından referans metot olarak kabul edilen HPLC yönteminin TS EN ISO/IEC 17025 Laboratuar Akreditasyon Standardı kapsamında belirlenen metot performans kriterlerine göre geçerli kılınması amaçlanmıştır. Doğrusallık R2, tayin limiti LoD veya ölçüm limiti LoQ değerleri sırasıyla 0.9999, 0.0837 µg/mL ve 0.279 µg/mL olarak belirlenmiştir. Tekrarlanabilirlik % RSD’si 2.613, tekrar üretilebilirlik % RSD’si ise 5.16 olarak hesaplanmıştır. Domoik asit analizi geri kazanım oranının, tekrarlanabilirlik ve tekrar üretilebilirlik çalışmalarından elde edilen veriler kullanılarak %71.3-%94.5 arasında değişmiştir. Gerçeklik % hata olarak %17.88, doğruluk oranı ise %82.12 olarak hesaplanmıştır. Çalışmada, alıkonma zamanı 6.816 – 6.974 dakika arasında değişmiştir

Anahtar Kelimeler:

Çift kabuklu yumuşakça, Domoik asit, Metot validasyonu

The Study of Method Validation of Reference Method by HPLC for Determining the Level of Domoic Acid DA , Amnesic Shellfish Poisoning ASP in Shellfish

In this study, it was aimed to validate the HPLC reference method accepted by European Union, which is used for the determination of the domoic acid content of shellfish, in relation with the method performance criteria under the scope of the TS EN ISO/IEC 17025 Standart of Laboratory Accreditation. Linearity R2, LoD and LoQ were determined as 0.9999, 0.0837 µg/mL and 0.279 µg/mL, respectively. RSD% of repeatability and RSD% of reproducibility were calculated as 2.613 and 5.16. The rate of recovery was found as 71.3-94.5% when values of repeatability and reproducibility studies were taken into account. Trueness, as a false%, was 17.88%, and the rate of trueness was 82.12%. Retention time fell into 6.816 – 6.974 min

Keywords:

Shellfish, Domoic acid, Method validation,

PDF

___

Demirel, S., Özay, G., 2001. Gıda laboratuarları ve akreditasyon Kongresi, Ekim 25-26, 2001, Eskişehir, Türkiye, 41- 44s. Ulusal Ölçümbilim 2008. Seafood safety. http://seafood.ucdavis.edu/Pubs/safety1.htm.
Özel, İ., 2003. Planktonoloji I. Ege Üniversitesi Su Ürünleri Fakültesi Yayınları No:145, İzmir.
Richardson, K., 1997. Advances In Marine Ecology. Vol. 31, Londra, 301-385s.
Kaniou-Grigoriadoul, I., Mouratidou, T., Katikou, P., 2005. Investigation on the presence of domoic acid in Grek shellfish. Harmful Algae 4: 717-723.
Council of the European Communities, 1997. Council Directive 97/61/EEC of 20 October 1997 that modifies the Annex of Directive 91/492/EEC that lays down the health conditions fort he production and the placing on the market of live bivalve molluscs. Off J Eur Communities L295: 35- 36.
Todd, E.C.D. (1993). Domoic acid and amnesic shellfish poisoning – A review. J Food Protec 56(1): 69-83.
Grimmelt, B., Nijjar, M.S., Brown, J., MacNair, N., Wagner, S., Johnson, G.R., Ahmend, J.F., 1990. Relationship between domoic acid levels in the blue mussel (Mytilus edulis) and toxicity in mice. Toxicon 28: 501-508.
Özhan, E., Alparslan, N., 2002. Türkiye’nin Kıyı ve Deniz Alanları 4. Ulusal Konferansı, İzmir, Türkiye, Bildiriler Kitabı, 1. cilt, 15-19s.
Quilliam, M.A., Xie, M., Hardstaff, W.R., 1995. A rapid extraction and cleanup procedure for the liquid chromatographic determination of domoic acid in unsalted seafood.J.AOAC Int. 78 (2): 543-554.
Resmi Gazete, 2008. Su Ürünleri Yönetmeliği. (Değişik RG-21/9/2008-27004) Ek-7. Çift Kabuklu Yumuşakçalarda Mikrobiyolojik Kabul Edilebilir Üst Sınır Değerler. Tarım ve Köy İşleri Bakanlığı, Koruma ve Kontrol Genel Müdürlüğü, Ankara. Toksikolojik ve
FDA, 2000. Analytical procedures and method validation: Chemistry, manufacturing, and controls. Federal Notices 5(169): 776-777.
Akdağ, İ., 2003. Metot Validasyonu Strateji Planı Seminer Notları. TÜBİTAK UME Ulusal Metroloji Enstitüsü, Kocaeli.
APVMA, 2004. Guidelines for the validation of analytical agricultural and veterinary chemical products. Australian Pesticites, Veteniary Medicines Authority. Available from http://www.apvma.gov.au.
Shah, V.P., Midha, K., Dighe, S., 1992. Analytical methods validation: bioavailability, bioequivance and pharmacokinetic studies. J. Pharm Sci. 81(3): 309-312.
Ertaş Söğüt, Ö., 1997. Evaluation of the analytical validation parameters of atomic absorption spectrometry. Ph. D. Thesis Ege University, Graduate School of Health Sciences, Analytical Chemistry.
Hajicostas, E., 2003. Validation of Analytical Methods, Springer-Verlag, Berlin.
Ludden, T.M., 1994. Estimation of Limit of Quantitation. Bio-Internal, Munich, Germany.
FDA, 1993. Technical Review Guide: Validation of Chromatographic Methods, Center for Drug Evaluation and Research (CDER), Rockville, MD.
EAL-P11, 1997. European Cooperation for Accreditation of Laboratories Validation of Test Methods. General Principles and Concepts. Edition 1.
Gardner, J.A., Coleman, S., Farrow, S.G., 1993. Why worry about your analytical methods? Analytical Proceedings 30: 183-185.
Huber, L., 2003. Good Laboratory Practice and Current Good Manufacturing Practice. Agilent Technologies. Packard, Waldbronn, Germany.