Van Yöresinde Sağlıklı ve Hasta Sığırların Solunum Yolundan İzole Edilen Pasteurella multocida Suşlarının İdentifikasyonu ve Kapsül Tiplerinin PCR ile Belirlenmesi

Bu araştırmada, Van yöresinde sağlıklı ve hasta sığırların üst ve alt solunum yolundan alınan svap örneklerinden izole edilen Pasteurella (P.) multocida suşlarının identifikasyonu ve PCR yöntemi ile kapsül tiplerinin belirlenmesi amaçlandı. Elde edilen izolatlar standart bakteriyolojik test yöntemleri ve KMT1 gen spesifik primerin kullanıldığı PCR (PM-PCR) ile identifiye edildi. İncelenen toplam 510 adet svap örneğinden standart bakteriyolojik test yöntemleriyle 60 adet P. multocida şüpheli izolat elde edildi. Şüpheli 60 izolatın 53 (%88.33)’ü PM-PCR ile P. multocida olarak identifiye edildi. Sağlıklı 222 sığırın 31 (%13.9)’inden, hasta olan 59 sığırın ise 19 (%32.2)’undan P. multocida izole edildi. Kapsül tip spesifik primerlerin kullanıldığı PCR ile tüm izolatlarda CapA gen spesifik 1044 bp’lik amplikonlar belirlendi. Sonuç olarak araştırmada elde edilen bulgular, standart bakteriyolojik test yöntemlerinin P. multocida izolatlarının ön identifikasyonunda önemli olduğunu ve hasta sığırlardan P. multocida izolasyon oranının sağlıklı görünen sığırlara göre daha yüksek olduğunu gösterdi. Bununla birlikte Van yöresindeki sığırların solunum yolunda P. multocida kapsül tip A suşlarının yaygın olduğu gözlendi.

Anahtar Kelimeler:

Pasteurella multocida, Kapsül Tip, PCR, Sığır

Identification of Pasteurella multocida Strains Isolated from Respiratory Tract of Healthy and Diseased Cattle and Determination of Capsular Types by PCR

The aim of this study was to identify Pasteurella (P.) multocida strains isolated from upper and lower respiratory tract of healthy and diseased cattle in Van region and to determine capsule type by PCR. The isolates were identified by standard bacteriological methods and PCR (PM-PCR) using KMT1 gene-specific primer. From the total of 510 examined swab samples, 60 isolates were suspected as P. multocida by standard bacteriological methods and 53 (88.33%) of them were identified as P. multocida by PM-PCR. P. multocida was isolated from 31 (13.2%) of 222 healthy cattle and 19 (32.2%) of 59 diseased cattle. In all isolates, CapA gene-specific amplicons (1044 bp) were detected by PCR using capsular type specific primers. In conclusion, the findings of this study showed that standard bacteriological methods were important for preliminary identification of P. multocida isolates and the isolation rate of P. multocida from diseased cattle was higher than those of healthy cattle. It was also observed that P. multocida capsular type A strains were common in the respiratory tract of the cattle in Van region.

Keywords:

Pasteurella multocida, Capsular Type, PCR, Cattle,

PDF

___

Al-Maary KS, Dawoud TM, Mubarak AS et al. (2017). Molecular characterization of the capsular antigens of Pasteurella multocida isolates using multiplex PCR. Saudi J Biol Sci, 24, 367-370. Carter GR (1984). Pasteurella, Yersinia and Francisella, chapter 11, in “Diagnostic Procedures in Veterinary Bacteriology and Mycologyˮ Fourth Edition, 111-121, Charles C Thomas, U.S.A.Cucco L, Massacci FR, Sebastiani C, et al. (2017). Molecular characterization and antimicrobial susceptibility of Pasteurella multocida strains isolated from hosts affected by various diseases in Italy. Vet Ital, 53,1, 21-27.Dabo SM, Taylor JD, Confer AW (2008). Pasteurella multocida and bovine respiratory disease. Anim Health Res Rev, 8 (2), 129-150.Dziva F, Muhairwa AP, Bisgaar M, Christensen H (2008). Diagnostic and typing options for investigating diseases associated with Pasteurella multocida. Vet Microbiol, 128, 1-22.Ewers C, Lübke-Becker A, Bethe A, Kiebling S, Filter M, Wieler LH (2006). Virulence genotype of Pasteurella multocida strains isolated from different hosts with various disease status. Vet Microbiol, 114, 304-317.Fillion LG, Cho HJ, Shewen PE, Raybould TJG, Wilkie BN (1985). Comparasion of serological techniques to measure antibody to Pasteurella haemolytica A1. Can J Comp Med, 49, 99-103.Guler L, Gunduz K, Sarisahin AS (2013). Capsular typing and antimicrobial susceptibility of Pasteurella multocida isolated from different hosts. Kafkas Univ Vet Fak Derg, 19, 5, 843-849.Harper M, Boyce JD, Adler B (2006). Pasteurella multocida pathogenesis: 125 years after Pasteur. FEMS Microbiol Lett, 265, 1-10.Horwood PL, Mahony TJ (2011). Multiplex real-time RT-PCR detection of three viruses associated with the bovine respiratory disease complex. J Virol Methods, 171, 360-363.Hotchkiss EJ, Hodgson JC, Schmitt-van de Leemput E, Dagleish MP, Zadoks RN (2011). Moleculer epidemiology of Pasteurella multocida in dairy and beef calves. Vet Microbiol, 151, 329-335.Jamali H, Rezagholipour M, Fallah S, et al. (2014). Prevalence, characterization and antibiotic resistance of Pasteurella multocida isolated from bovine respiratory infection. Vet J, 202, 381-383.Khamesipour F, Momtaz H, Mamoreh MA (2014). Occurence of virulence factors and antimicrobial resistance in Pasteurella multocida strains isolated from slaughter cattle in Iran. Front Microbiol, 5, 1-9.Kilic A, Muz A (2004). Pnömonili sığır akciğerlerinden bakteri izolasyonları ve izole edilen Pasteurella’ların polimeraz zincir reaksiyonu ile saptanması. Turk J Vet Anim Sci, 28, 217-223.Kumar P, Singh VP, Agrawal RK, Singh S (2009). Identification of Pasteurella multocida isolates of ruminant origin using polymerase chain reaction and their antibiogram study. Trop Anim Health Prod, 41, 573-578.Mohamed RA, Abdelsalam EB (2008). A review on pnömonic pasteurellosis (respiratory mannheimiosis) with emphasis on pathogenesis, virulence mechanisms and predisposing factors. Bulg J Vet Med, 11, 3, 139-160.Onat K, Kahya S, Carlı KT (2010). Frequency and antibiotic susceptibility of Pasteurella multocida and Mannheimia haemolytica isolates from nasal cavities of cattle. Turk J Vet Anim Sci, 34, 1, 91-94.Ozbey G, Muz A (2004). Pnömonili koyun ve keçilerin akciğerlerinden aerobik bakteri izolasyonları ve izole Pasteurella multocida ve Mannheimia haemolytica’nın polimeraz zincir reaksiyonu ile saptanması. Turk J Vet Anim Sci, 28, 209-216.Quinn PJ, Markey BK, Leonard FC, FitzPatrick ES, Fanning S, Hartigan PJ (2011). Pasteurella species, Mannheima haemolytica ve Bibersteinia trehalosi, chapter 27, in “Veterinary Microbiology and Microbial Diseaseˮ Second Edition, 300-308, John Wiley & Sons Ltd., UK.Sarangi LN, Thomas P, Gupta SK, et al. (2015). Virulence gene profiling and antibiotic resistance pattern of Indian isolates of Pasteurella multocida of small ruminant origin. Comp Immunol Microb, 38, 33-39.Solmaz H, Ilhan Z (2011). Pnömonili koyun akciğerlerinden izole edilen Mannhaeima haemolytica izolatlarının bazı antibiyotiklere in vitro duyarlılıklarının belirlenmesi. AVKAE Derg,1, 15-18.Tel OY, Keskin O (2010). Koyun akciğerlerinden Pasteurella multocida ve Mannheimia haemolytica izolasyonu ve antibiyotiklere duyarlılığı. YYU Vet Fak Derg, 21, 1, 31-34.Townsend KM, Boyce JD, Chung JY, Frost AJ, Adler B (2001). Genetic organization of Pasteurella multocida cap loci and development of a multiplex capsular PCR typing system. J Clin Microbiol, 39, 3, 924-929.Townsend KM, Frost AJ, Lee CW, Papadimiriou JM, Dawkins HJS (1998). Development of PCR assays for species and type specific identification of Pasteurella multocida isolates. J Clin Microbiol, 36, 4, 1096-1100.Ulker H, Kucuk D, Cantekin Z, Solmaz H (2012). Hatay yöresinde kesimhanede kesilen sığır akciğerlerinden Pasteurella multocida ve Mannheimia haemolytica izolasyonu ve antibiyotiklere duyarlılığı. AVKAE Derg, 2, 2, 10-14.Verma S, Sharma M, Katoch S, et al. (2013). Profiling of virulence associated genes of Pasteurella multocida isolated from cattle. Vet Res Commun, 37, 83-89.Yener Z, Gurturk K, Gulbahar Y, Solmaz H (2001). Bitlis mezbahasında kesilen keçilerde pnömoni olguları üzerinde patolojik ve bakteriyolojik çalışmalar. Vet Bil Derg, 17, 1, 13-20.