Nested PCR ve Kullanım Alanları
Nested PCR, PCR tekniğinin hassasiyetini artırmak için geliştirilen en popular yöntemlerden biridir. İstenilen DNA dizisinin bulunup çoğaltılmasında hassasiyeti 104 kat artırdığı tahmin edilmektedir. Bu reaksiyon mekanizmasında birbirini takip eden iki polimeraz zincir reaksiyonunu içermektedir. İlk amplifikasyonda hedef DNA’nın dış bölgesine özgün iki dış primer kullanılır ve uzun bölge çoğaltılır. İkinci amplifikasyon basamağında, ilk amplifikasyondan gelen bölgenin iç bölgesine bağlanan iki iç primer kullanılarak küçük bölgenin çoğaltılması sağlanmaktadır. İkinci PCR işleminden sonra ortada istenilmeyen DNA dizisi kalmamaktadır. Bu sistem günümüzde, Genetiği değiştirilmiş organizmalar (GDO), patojen teşhisinde, viral enfeksiyonlarda, genin ifadesinde, fungal tanıda ve birçok medikal alanda kullanılmaktadır.
Nested PCR and Applications Area
The Nested PCR is one of the most popular methods for improving the specificity of the PCR techniques. It is assumed that Nested PCR increase 104 fold for accuracy of the amplification of the target DNA sequence. This reaction mechanism contains two consecutive polymerase chain reactions. The two specific primer of outer region of DNA are used and the long area is replicated at the first amplification. The two primers of inner area that is comefrom first amplification are used for reproduction of small area at the second amplification step. There is no undesirable DNA sequence after the second PCR step. Nowadays this system have been using for GMO, pathogen diagnosis, viral infections, gene expression, fungal diagnosis and many medical fields
