Süheyla DOĞAN, Süleyman YAZAR, Salih KUK

Toprakta serbest yaşayan ve insanda parazitlenebilen bazı amiplerin izolasyonu ve moleküler karakterizasyonu

Serbest yaşayan amiplerden Acanthamoeba, Naegleria, Balamuthia, Sappinia, Vahlkampfia ve Hartmannella; toprakta, musluk suyu, göl, nehir, yüzme havuzu gibi çeşitli su kaynaklarında, havada, lens solüsyonlarında bulunabilmektedir. Doğada serbest olarak yaşayan bu amiplerin bir kısmı insanlarda ciddi hastalıklara yol açabilmektedir. Bu çalışmada; Kayserinin çeşitli bölgelerinden alınan toprak örneklerinde serbest yaşayan potansiyel patojen amip türlerinin izolasyonu ve genotiplendirilmesi amaçlanmıştır. Toplam 20 farklı bölgeden alınan birer örnek selüloz nitrat filtreden geçirilip Escherichia coli ile kaplanmış besleyici değeri olmayan agar plaklarına aktarılmıştır. 37 0Cde kültürü yapılan örneklerin iki hafta boyunca üremeleri gözlenerek, pozitif olduğu düşünülen örneklerden DNA izolasyonu gerçekleştirildi. Acanthamoeba, Naegleria, Balamuthia spesifik primerlerle PCRı yapılan toplam 20 toprak örneğinin sekizinin Acanthamoeba, üçünün Naegleria pozitif olduğu belirlenirken, örneklerin hiçbirinde Balamuthia saptanmamıştır. Bu çalışma ile insan sağlığı açısından tehdit oluşturabilecek serbest yaşayan bazı amip türlerinin varlığı Kayserideki toprak örneklerinde gösterilmiştir.

Solatıon and molecular characterızatıon of some free-lıvıng amoeba ın soıl whıch can be parasıtısıng ın human

Acanthamoeba, Naegleria, Balamuthia, Sappinia, Vahl- kampfia and Hartmannella of the free-living ameba are commonly encountered in soil, air, lens solutions and water sources such as tap water, lakes, rivers and swimming pools. Some of those free-living ameba may cause serious diseases in human. The main objective of this study is to isolate and genotype the free-living po- tential pathogen amoeba species in the soil samples obtained from different regions of Kayseri. Each of the total 20 samples are passed through cellulose nitrate filter and transported to the non nutritional plates and coated with Escherichia coli agar. The samples which are cultured at 37 0C are observed for two weeks in order to observe the reproduction and isolate the DNA samples that are thought to be positive. Eight of the 20 samples which are undergoing PCR with specific prim- ers were Acanthamoeba positive and three of them were Naegleria positive. Besides, Balamuthia was not detected in any of the samples. In conclusion, in this study the presence of some free-living amoeba species which may threaten human health is shown in the soil samples obtained from Kayseri.

PDF

___

1. Martinez AJ, Janitschke K. Acanthamoeba, an opportunistic microorganism: a review. Infectio 1985; 13: 251-256.
2. Schuster FL, Visvesvara GS. Free-living amoebae as opportunistic and non-opportunistic pathogens of humans and animals. Int J Parasitol 2004; 34: 1001 1027.
3. Martinez AJ, Visvesvara GS. Free-living amphizoic and opportunistic amebas. Brain Pathol 1997; 7: 583599.
4. Gelman BB, Rauf SJ, Nader R, et al. Amoebic encephalitis due to Sappinia diploidea. JAMA 2001; 285: 24502451.
5. Schroeder JM, Booton GC, Hay J, et al. Use of subgenic 18S ribosomal DNA PCR and sequencing for genus and genotype identification of acanthamoebae from humans with keratitis and from sewage sludge. J Clin Microbiol 2001; 39: 1903 1911.
6. Schild M, Gianinazzi C, Gottstein B, et al. PCR-based diagnosis of Naegleria sp. infection in formalin-fixed and paraffin-embedded brain sections, J Clin Microbiol 2007; 45: 564567.
7. Booton GC, Carmichael JR, Visvesvara GS, et al. Identification of Balamuthia mandrillaris by PCR assay using the mitochondrial 16S rRNA gene as a target. J Clin Microbiol 2003; 41: 453455.
8. Qvarnstrom Y, da Silva AJ, Schuster FL, et al. Molecular confirmation of Sappinia pedata as a causative agent of amoebic encephalitis. J Infect Dis 2009; 199: 1139-1142.
9. Tsvetkova N, Schild M, Panaiotov S, et al. The identification of free-living environmental isolates of amoebae from Bulgaria. Parasitol Res 2004; 92: 405413.
10. Saygı G. Erzurumda topraktan Acanthamoeba türü- nün soyutlanması. Türkiye Parazitol Derg 1979; 2: 109-114.
11. Akın Z. Toprak ve Su Örneklerinden Özgür Yaşayan Amiplerin Soyutulması, Tanımlanması, Özellikleri- nin Belirlenmesi ve Patojenlerinin Araştırılması. Yüksek Lisans Tezi, Cumhuriyet Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Sivas, 2000.
12. Saygı G, Akın Z. Sivasta toprak ve termal su örnek- lerinden Acanthamoeba ve Neagleria türlerinin soyutulması. Türkiye Parazitol Derg 2000; 24: 237- 242.
13. Kilic A, Tanyuksel M, Sissons J, ve ark. Isolation of Acanthamoeba isolates belonging to T2, T3, T4, and T7 genotypes from environmental samples in Ankara, Turkey. Acta Parasitol 2004; 49: 246252.
14. Ertabaklar H, Türk M, Dayanır V, et al. Acanthamoeba keratitis due to Acanthamoeba genotype T4 in a non-contact-lens wearer in Turkey. Parasitol Res 2007; 100: 241-246.
15. Özkoç S, Tuncay S, Delibaş SB, et al. Identification of Acanthamoeba genotype T4 and Paravahlkampfia spp. from two clinical samples. J Med Microbiol 2008; 57: 392-396.
16. Ertabaklar H, Dayanır V, Apaydın P, ve ark. Olgu Sunumu: Acanthamoeba Keratiti. Türkiye Parazitol Derg 2009; 33: 283-285.