Yasemin SAKARYA, Sirri KAR, Mehmet TANYÜKSEL, Zafer KARAER, Cahit BABÜR, ZATİ VATANSEVER

Detection of cryptosporidium spp. in humans and calves through nested PCR and carbol fuchsin staining methods in Ankara, Turkey

Bu çalışmada, Ankara’nın değişik hastanelerine ishal şikayeti ile başvuran 98 hastadan ve yine Ankara’da bulunan değişik sığırcılık işletmelerindeki 32 buzağıdan alınan toplam 130 dışkı, carbol fuchsin boyama yöntemi ve nested PCR yardımı ile Cryptosporidium spp. yönünden taranmıştır. Sonuç olarak nested PCR yöntemiyle taranan örneklerden toplam 13 (%10.0)’ünde pozitif amplifikasyon ürününe rastlanmış, ilgili pozitiflerin 12 (%37.5)’si buzağılardan, 1 (%1.02)’i ise insan dışkılarından elde edilmiştir. Karbol fuksin boyama yöntemi ile yapılan taramalarda ise insan dışkılarının birinden (%1.02) ve buzağı dışkılarının 7 (%21.88)’sinde olmak üzere, toplam 8 (%6.15) dışkı örneğinde oocystlere rastlanmıştır. Kullanılan tanı teknikleri ile ilgili olarak, nested PCR’ın cryptosporidiosisin tanısında etkili bir şekilde kullanılabileceği, carbol fuchsin boyama yönteminin ise yeterli derecede özgül olmasına rağmen, özellikle az oocyst atılımı ile karakterize olgularda duyarlılığının zayıf kaldığı sonucuna varılmıştır.

Anahtar Kelimeler:

Cryptosporidium, buzağı, sığır, cryptosporidiosis, teşhis, tanı teknikleri, insan hastalıkları, insan, polimeraz zincir reaksiyonu, protozoa enfeksiyonları

Ankara’da insan ve buzağılarda Cryptosporidium spp. varlığının nested PCR ve carbol fuchsin boyama yöntemleri ile belirlenmesi

In this study, a total of 130 fecal samples, obtained from 98 humans and 32 calves from different hospitals and dairy farms in Ankara, respectively were analyzed with carbol fuchsin staining and nested PCR to determine the presence of Cryptosporidium spp. Nested PCR revealed a total of 13 (10.0%) positive amplification results; 12 (37.5%) were from calves and 1 (1.02%) from humans. Oocysts were observed in 8 (6.15%) fecal samples belonging to 7 (21.88%) calves and 1 (1.02%) human by carbol fuchsin staining. Concerning the detection technics, it was concluded that nested PCR can be successfully used in diagnosis of cryptosporidiosis, and although carbol fuchsin staining method has sufficient specificity it is less sensitive, especially in cases characterized with excretion of fewer oocysts.

Keywords:

Cryptosporidium, calves, cattle, cryptosporidiosis, diagnosis, diagnostic techniques, human diseases, man, polymerase chain reaction, protozoal infections,

PDF

___

1. Dubey JP, Speer CA, Fayer R: Cryptosporidiosis of Man and Animals. CRC Press, USA. pp. 199, 1990.
2. Miller DL, Ligett A, Radi ZA, Branch LO: Gastrointestinal cryptosporidiosis in a puppy. Vet Parasitol, 115, 199-204, 2003.
3. Egyed Z, Sreter T, Szell Z, Varga I: Charecterization of Cryptosporidium spp.- Recent developments and future needs. Vet Parasitol, 111, 103-114, 2003.
4. Xiao L, Sulaiman IM, Ryan UM, Zhou L, Atwill ER, Tischler ML, Zhang X, Fayer R, Lal AA: Host adaptation and hostparasite co-evolution in Cryptosporidium: Implications for taxonomy and public health. Int J Parasitol, 32, 1773-1785, 2002.
5. Fayer R, Morgan U, Upton SJ: Epidemiology of Cryptosporidium: transmission, detection and identification. Int J Parasitol, 30, 1305-1322, 2000.
6. Starling CR, Arrowood MJ: Cryptosporidia. In, Kreier JR, Baker J (Eds): Parasitic Protozoa, 2d ed. vol. 6. Academic Press. San Diego, pp.156-225, 1993.
7. Sears CL, Kirckpatrick BD: Cryptosporidiosis and isosporiosis. In, Gillespie SH, Pearson RD (Eds): Principles and Practice of Clinical Parasitology. pp. 139-164, John Wiley & Sons Ltd. Press. 2001.
8. Carey CM, Lee H, Trevors JT: Biology, persistence and detection of Cryptosporidium parvum and Cryptosporidium hominis oocyst. Water Res, 38, 818-862, 2004.
9. Heine J: Eine einfache Nachweismethode für Kryptosporidien im Kot. Zbl Vet Med B, 29, 324-327, 1982.
10. Xiao L, Singh A, Limor J, Graczyk TK, Gradus S, Lal AA: Molecular characterization of Cryptosporidium oocysts in samples of raw surface water and wastewater. Appl Environ Microbiol, 67, 1097-1101, 2001.
11. Yücel A, Bulut V, Yılmaz M: Elazığ yöresinde diyareli olgularda ve hemodiyaliz olgularında Cryptosporidium spp. araştırılması. Türk Parazitol Derg, 24 (2): 126-132, 2000.
12. Al-Qubaji M: Diyareli çocuk dışkı örneklerinde Cryptosporidium oocyst’lerinin araştırılması. Doktora Tezi. Ankara Üniv. Sağlık Bili Enst, Eczacılık Programı, Ankara, 2005.
13. Doğan N, Akgün Y: İshalli olgularda Cryptosporidium oocystlerinin araştırılması. Türk Parazitol Der, 22 (3): 243-246, 1998.
14. Özcan K, Köksal F, Aksaray N, Yiğit S: Çocuk ishallerinde Cryptosporidium’un rolü. T Klin Tıp Bil Araş Derg, 5, 329-332, 1987.
15. Ok ÜZ, Kavaklı K, Çetingül N, Öztop S, İşli G, Üner A, Özcel MA: Kemoterapi uygulanan tümörlü çocuklarda barsak parazitlerinin sıklığı. Türk Parazitol Derg, 19, 385-390, 1995.
16. Başoğlu A, Turgut K, Maden M, Kaya O: İshalli buzağılarda Cryptosporidium’ların önemi üzerinde araştırmalar. Hayvancılık Araş Derg, 2 (1): 40-41, 1992.
17. Emre Z, Aalabay M, Düzgün A, Çerçi H: Comparison of staining and concantration techniques for detection of Cryptosporidium oocysts in cattle faecal specimens. Turk J Vet Anim Sci, 21, 293-296, 1997.
18. Yu JR, Seo M: Infection status of pigs with Cryptosporidium parvum. Korean J Parasitol, 42 (1): 45-47, 2004.
19. Clark DP: New insights into human cryptosporidiosis. Clin Microbiol Rev, 12 (4): 554-563, 1999.
20. Weber R, Bryan RT, Juranek DD: Improved stool concentration procedure for detection of Cryptosporidium oocysts in fecal specimens. J Clin Microbiol, 30 (11): 2869- 2873, 1992.
21. Kar S, Najdrowski M, Daugschies A: Cryptosporidium parvum ile enfekte edilen bir buzağıda ookist atılımının carbol fuchsin, modifiye ziehl neelsen boyama teknikleri ve klasik PCR ile takibi. 15. Ulusal Parazitoloji Kongresi, Poster Sunumu, 18-23 Kasım 2007.
22. Kato S, Lindergard G, Mohammed HO: Utility of the Cryptosporidium oocyst wall protein (COWP) gene in a nested PCR approach for detection infection in cattle. Vet Parasitol, 2475, 1-7, 2002.
23. Xiao L, Escalante L, Yang C, Sulaiman I, Escalante AA, Montali RJ, Fayer R, Lal AA: Phylogenetic analysis of Cryptosporidium parasites based on the small-subunit rRNA gene locus. Appl Environ Microbiol, 65, 1578-1583, 1999.
24. Xiao L, Morgan UM, Limor J, Escalanye A, Arrowood M, Shulaw W, Thompson RCA, Fayer R, Lal AA: Genetic diversity within Cryptosporidium parvum and related Cryptosporidium species. Appl Environ Microbiol, 65, 3386-3391, 1999.