SERPİL DAĞ, FATİH BÜYÜK, HASAN ÖZEN, ÖZGÜR ÇELEBİ, MUSA KARAMAN, DOĞAN AKÇA, Mithat ŞAHİN

Detection of Brucella spp. in vaginal swab samples of aborting cattle: Comparison of immunoperoxidase to bacteriological culture technique

Brusellozis sığır yetiştiriciliğinde ekonomik kayıplara neden olan önemli bir hastalıktır. Kars’ta Brucella spp. nedenli abortlar oldukça yaygındır. Bu nedenle Brusellozis olgularının tespiti büyük önem arz etmektedir. Bu çalışmada; Brusellozisin tespiti amacıyla immunokimyasal boyama yöntemi test edildi ve bakteriyolojik kültür yöntemi ile karşılaştırıldı. Abortu takiben toplam 261 vajinal svap örneği ineklerden toplandı. Kültür yöntemi ile 25 hayvanda Brucella spp. izole edildi. Tüm Brucella izolatları Brucella abortus saha suşu olarak identifiye edildi ve B. abortus biyotip 3 olarak tiplendirildi. Kültür pozitif vajinal örneklerden hazırlanan sürme preparatlar immunoperoksidaz yöntemi ile boyandı ve 25 hayvandan 22’si Brucella pozitif tespit edildi. İmmunoperoksidaz yönteminin duyarlılığı ve özgüllüğü sırasıyla %88 ve %92 olarak hesaplandı.

Anahtar Kelimeler:

tanı teknikleri, Brucella abortus, yavru atma, brusellozis, sığır, hücre kültürü, saptama, teşhis, immunoperoksidaz tekniği, metodoloji, gebelik, soy, vajina

Abort yapan sığırların vajinal sıvap örneklerinden Brucella spp. tespit edilmesi: İmmunoperoksidaz ve bakteriyolojik kültür yönteminin karşılaştırılması

Brucellosis is an important disease in terms of economic losses in cattle breeding. Brucella spp. associated abortion is common in Kars, Turkey. Determination of Brucellosis cases therefore poses great importance. In this study, an immunochemical staining technique was tested in detecting cattle with Brucellosis and compared to bacteriological culture technique. Post-abortion, total of 261 vaginal swab samples were collected from cows. Brucella spp. were isolated from 25 animals by cultural method. All Brucella isolates were identified as Brucella abortus field strain and biotyped as B. abortus biotype 3. Smears prepared from culture positive vaginal samples were stained by immunoperoxidase technique, and 22 out of 25 animals were detected as Brucella-positive. Sensitivity and specificity of the immunoperoxidase technique were calculated as 88% and 92%, respectively.

Keywords:

diagnostic techniques, Brucella abortus, abortion, brucellosis, cattle, cell culture, detection, diagnosis, immunoperoxidase technique, methodology, pregnancy, strains, vagina,

PDF

___

1. Taleski V, Kantardjiev T, Cretnic Z: An overview of the epidemiology and epizootology of Brucellosis in selected countries of Central and South East Europe. Vet Microbiol, 90 (1-4): 147-155, 2002.
2. WHO: Brucellosis in human and animal. World Health Organization for Animal Health and FAO. Geneva, 2006.
3. Aydın F, Leloğlu N, Şahin M, Otlu S: Kars yöresinde sığır ve koyunlarda görülen abortların bakteriyolojik yönden araştırılması. 1. Ulusal Veteriner Mikrobiyoloji Kongresi, 27-29 Ekim, Ankara, Türkiye, s. 47. 1994.
4. Peter AT: Abortions in dairy cows: New insights and economic impact. Adv Dairy Technol, 12, 233-244, 2000.
5. Sağlam YS, Türkütanıt SS, Taştan R, Bozoğlu H, Otlu S: Kuzeydoğu Anadolu Bölgesinde görülen bakteriyel sığır ve koyun abortlarının etiyolojik ve patolojik yönden incelenmesi. Vet Bil Derg, 14 (2): 133-145, 1998.
6. Büyük F, Şahin M: Kars yöresinde atık yapan ineklerin çeşitli örneklerinden Brucella etkenlerinin kültürel ve moleküler yöntemlerle araştırılması ve olguların epidemiyolojik analizi. Kafkas Univ Vet Fak Derg, 17 (5): 809-816, 2011.
7. Fensterbank R: Brucellosis in cattle, sheep and goats. OIE Technical Series, No: 6, pp. 9-35, 1987.
8. Bercovich Z: The use of skin delayed-type hypersensitivity as an adjunct test to diagnose brucellosis in cattle: A review. Vet Quart, 22 (3): 123-130, 2000.
9. Al Dahouk S, Tomaso H, Nöckler K, Neubauer H, Frangoulidis D: Laboratory-based diagnosis of brucellosis - A review of the literature. Part I: Techniques for direct detection and identification of Brucella spp. Clin Lab, 49 (9-10): 487-505, 2003.
10. Temur A, Dinler U, Seyitoğlu Ş, Kılınç Ü, Yalçın E: Erzurum ve çevre illerde bulunan sığırlarda chlamydial abortların bakteriyolojik, histo-patolojik ve immunohistokimyasal yöntemlerle araştırılması. http://agris.fao.org/aos/records/TR2010000213. Accessed: 15.11.2011.
11. Apan T, Yıldırım M, İstanbulluoğlu E: Seroprevalence of brucellosis in human, sheep, and cattle populations in Kırıkkale (Turkey). Turk J Vet Anim Sci, 31 (1): 75-78, 2007.
12. Hodul M, Gümüşsoy KS: Develi yöresinde sığır brusellozunun serolojik testlerle (RBPT, SAT, C-ELISA, CFT) teşhisi. Erciyes Üniv Sağlık Bil Derg, 18 (3): 167-174, 2009.
13. Ceylan E, Irmak H, Buzğan T, Karahocagil MK, Evirgen Ö, Sakarya N, Akdeniz H, Demiröz AP: Van iline bağlı bazı köylerde insan ve hayvan populasyonunda bruselloz seroprevalansı. Van Tıp Derg, 10 (1): 1-5, 2003.
14. Pehlivanoğlu F, Öztürk D, Günlü S, Güldalı Y, Türütoğlu H: Prevalence of brucellosis in dairy herds with abortion problems. Kafkas Univ Vet Fak Derg, 17 (4): 615-620, 2011.
15. Güllüce M: Kars ve çevresinde sığırlarda Brucella abortus’a karşı oluşan antikorların ELISA ve diğer serolojik yöntemlerle (RBPT, SAT, MRT) saptanması ve sonuçların karşılaştırılması. Doktora Tezi, Kafkas Üniv. Sağlık Bil. Enst., 1993.
16. Ünver A, Erdogan HM, Atabay HI, Şahin M, Güneş V, Çitil M, Gökçe HI: Sığır atıklarından izole edilen Brucella türlerinin RAPD-PCR ile genotiplendirilmesi. Kafkas Univ Vet Fak Derg, 12 (2): 121-127, 2006.
17. Hornitzky M, Searson J: The relationship between the isolation of Brucella abortus and serological status of infected, nonvaccinated cattle. Aust Vet J, 63 (6): 172-174, 1986.
18. MacMillan A: Conventional serological tests In, Nielsen K, Duncan JR (Eds): Animal Brucellosis. pp. 153-198. CRC Press Inc., 1990.
19. Alton GG, Jones LM, Angus RD, Verger JM: Techniques for the brucellosis laboratory. INRA (Institut National de la Recherche Agronomique), Paris, France, 1988.
20. Moore FM, Petrak ML, McMillian MC: Diagnosis of chlamydial infection in pet birds: comparison of cloacal-swab culture and peroxidase-antiperoxidase methods. Avian Dis, 32 (1): 157-162, 1988.
21. Şahin M, Atabay Hİ, Otlu S, Ünver A, Çelebi Ö: Kars ve çevresinde bulunan insan, sığır ve koyunlarda Brusellosisin prevalansının serolojik ve kültürel metotlarla araştırılması. VI. Ulusal Mikrobiyoloji Kongresi, Elazığ, 7-9 Eylül, 2004.
22. Çelebi Ö, Otlu S: Kars yöresinde atık yapmış inek sürülerinden alınan süt ve vajinal sıvap örneklerinden Brusella etkenlerinin bakteriyolojik ve moleküler tanımlanması. Kafkas Univ Vet Fak Derg, 17 (1): 53-58, 2011.
23. Stringfellow DA, Scanlan CM, Hannon SS, Panangala VS, Gray BW, Galik PA: Culture of uterine flushings, cervical mucosa, and udder secretions collected post-abortion from heifers artificially exposed to Brucella abortus. Theriogenology, 20 (1): 77-83, 1983.
24. Arda M, Minbay A, Leloğlu N, Aydın N, Karaman M, Akay Ö, Ilgaz A, İzgür M, Diker KS: Özel Mikrobiyoloji. 4. Baskı, Medisan, Ankara, 1997.
25. Aydın N: Brucella infeksiyonları. In, Aydın N, Paracıkoğlu J (Eds): Veteriner Mikrobiyoloji (Bakteriyel Hastalıklar). s. 145-163. İlke-Emek Yayınları, Ankara, 2006.
26. Garin-Bastuji B, Blasco JM, Marin C, Albert D: The diagnosis of brucellosis in sheep and goats, old and new tools. Small Rumin Res, 62 (1-2): 63-70, 2006.
27. Tuzcu M, Özmen M, Tuzcu N, Yoldaş A, Topçuoğlu H: Atık sığır fetüslerinde Brusellozisin patolojik, immunohistokimyasal, mikrobiyolojik yöntemlerle ve gerçek zamanlı PZR ile teşhisi. AVKAE Derg, 1, 8-14, 2011.
28. Durmaz R: Nükleik asit amplifikasyon yöntemlerinde sorunlar ve standardizasyon. In, Durmaz R (Ed): Uygulamalı Moleküler Mikrobiyoloji. s. 45-56. 2. Baskı, Nobel Tıp Kitabevleri, İstanbul, 2001.
29. Fidancı HA, Akın S, Alabay M, Güvener N: Sığırlarda Brucella abortus’a karşı oluşan antikorları saptamada ELISA ve diğer serolojik tekniklerin karşılaştırılması. Ankara Üniv Vet Fak Derg, 42, 553-557, 1995.
30. Radostits OM, Gay CC, Hinchcliff KW, Constable PD: Veterinary Medicine. 10th ed., pp. 963-984. Saunders Elsevier, UK, 2008.
31. Brees DJ, Reimer SB, Cheville NF, Florance, Thoen CO: Immuno-histochemical detection of Mycobacterium paratuberculosis in formalin-fixed, paraffin-embedded bovine tissue section. J Vet Diagn Invest, 12, 60- 63, 2000.
32. Meador VP, Deyoe BL: Intracellular localization of Brucella abortus in bovine placenta. Vet Pathol, 26 (6): 513-515, 1989.
33. Alberts JN, Erasmus JA: Detection of Brucella abortus antigens by immunoperoxidase histochemical staining of lochia smears. Onderstepoort J Vet Res, 62 (2): 147-150, 1995.