2015

Pnömonili koyun ve keçilerin akciğerlerinden aerobik bakteri izolasyonları ve izole Pasteurell amultocida ve Mannheimia haemolytica' nın polimeraz zincir reaksiyonu ile saptanması

Bu çalışmada Pasteurella'ların ve diğer aerobik bakteriyel etkenlerin koyun ve keçilerin pnömonili akciğer örneklerinden izolasyonu ve izole Pasteurella multocida ve Mannheimia haemolytica'mn kültür yöntemi ve polimeraz zincir reaksiyonu (PZR) ile identifikasyonu amaçlandı. Ayrıca şüpheli P. multocida izolatlarına fare patojenite testi yapıldı. Akciğer örneklerinin % 7 koyun kanlı ağarda 24-48 saatlik kültürü sonucunda, 350 koyun akciğerinden 15 (96 4,3) P. multocida ve 8 (96 2,3) M. haemolytica izole ve identifiye edildi. Keçilerden toplanan 150 akciğer örneğinden ise 1 (96 0,7) P. multocida ve 6 (96 4,0) M. haemolytica izole ve identifiye edildi. Akciğerlerden P. multocida ve M. haemolytica'nm izolasyon oranlarının karşılaştırılması sonucunda farkın istatistiksel olarak önemli olmadığı belirlendi (koyunlarda P = 0,2 ve keçilerde P = 0,12). Fare patojenite testi ile koyunlarda 15 P. multocida izolatından 13 (96 86,7)'ü ve keçilerde ise izole edilen bir P. multocida izolatı pozitif bulundu. P. multocida ve M. haemolytica izolatlarının tümünün PZR ile de pozitif olduğu saptandı. Bununla birlikte, toxA geninden hazırlanan primerlerin kullanılması ile yapılan PZR ile P. multocida izolatlarının hiçbirinde pozitif sonuç elde edilemedi. Sonuç olarak bu çalışma, P. multocida ve M. haemolytica'nm doğru ve çabuk identifikasyonu için PZR'nin uygulanabilirliğini ortaya koymuştur.

Isolation of aerobic bacterial agents from the Lungs of sheep and goats with pneumonia and detection of Pasteurella multocida and Manheimia haemolytica by polymerase chain reaction

The purpose of this study was to isolate Pasteurella spp and other aerobic bacterial agents from the lungs of sheep and goats with pneumonia and to identify Pasteurella multocida and Mannheimia haemolytica by both culture methods and polymerase chain reaction (PCR). In addition, mouse pathogenecity tests were carried out on suspected P. multocida isolates. In the examination of lung samples collected from sheep, 15 (4.3%) P. multocida and 8 (2.3%) M. haemolytica strains were isolated and identified. The numbers of species identified in the goat samples were 1 (0.7%) for P. multocida and 6 (4%) for M. haemolytica. The differences between the numbers of P. multocida and M. haemolytica strains isolated from the sheep and goat lung samples were not statistically significant (P = 0.2 in sheep and P = 0.12 in goats). Thirteen (86.7%) P. multocida isolates were positive in the mouse pathogenecity test in sheep. One P. multocida isolate from goats was also positive- in the mouse pathogenecity test. . All P. multocida and M. haemolytica strains that tested positive by culture also tested positive by PCR. However, no toxigenic P. • multocida were detected in any isolates by PCR using primers derived from the toxA gene. In conclusion, this study showed the feasibilty of PCR for the accurate and rapid identification of P. multocida and M. haemolytica.

PDF

___

1. Davies, D.H.: Aetiology of Pneumonia of Young Sheep. Preg. Vet. Miçrobiol. Immun. 1985; 1: 229-248.
2. Brogden, K.A., Lehmkuh, I.H.D., Cutlip, R.tt: Pasteurella haemolytica Complicated Respiratory Infections in Sheep and Goats. Vet. Res. 1998; 29: 233-254. 3. Highlander, S.K.: Molecular Genetic Analysis of Virulence in Mannheimia (Pasteurella)' haemolytica. Fron. Biosci. 2001; 6: 1128-1150.
4. Yates, W.D.G.: A Review of Infectious Bovine Rhinotracheitis, Shipping Fever Pneumonia and Viral-Bacterial Synergism in Respiratory Disease of Cattle. Can. J. Comp. Med. 1982; 46: 225-263.
5. Frank, G.H.: Pasteurellosis of Cattle. In "Pasteurella and Pasteurellosis" edited by Adlam C. and Rutter J.M., Academic Press Inc., New York, 1989.
6. Townsend, K.M., Hanh, T.X., Boyle, D.O., Wilkie, I., Phan, T.T., Wijewardana, T.G., Trung, N.T., Frost, A.J.: PCR Detection and Analysis of Pasteurella multocida from the Tonsils of Slaughtered Pigs in Vietnam. Vet. Microbiol. 2000; 72: 69-78.
7. Kasten, R.W., Carpenter, T.E., Snipes, K.P., Hirsh, D.C.: Detection of Pasteurella multocida-speslflc DNA in Turkey Flocks by the Use of the Polymerase Chain Reaction. Avian Dis. 1997; 41:676-682.
8. Muhairwa, A.P., Christensen, J.P., Bisgaard, M.: Investigations on the Carrier Rate of Pasteurella multocida in Healthy Commercial Poultry Flocks and Flocks Affected by Fowl Cholera. Avian Pathol. 2000; 29: 133-142.
9. Townsend, K.M., Frost, A.J., Lee, C.W., Papadimitriou, J.M., Dawkins, H.J.S.: Development of PCR Assay for Species and Type-Specific Identification of Pasteurella multocida Isolates. J. Clin. Microbiol. 1998; 36: 1096-1100.
10. Fodor, J., Penzes, Z., Varga, J.: Coagglutination Test for Serotyping Pasteurella haemolytica. J. Clin. Microbiol. 1996; 34: 393-397.
11. Neumann, S., Leeb, T., Brenig, B.: Vergleich Zwischen PCR und Kültüreller Untersuchung zum Nachweis von Infektionen mit Pasteurella multocida beim Hund. Kleintierpraxis. 1998; 43: 69-74.
12 Kamp, E.M., Bokken, G.C.A.M., Vermeulen, T.M.M., de Jong, M.F., Buys, H.E.C.M., Reek, F.H., Smits M.A.: A Specific and Sensitive PCR Assay Suitable for Large-scale Detection of Toxigenic Pasteurella multocida in Nasal and Tonsillar Swabs Specimens of Pigs. J. Vet. Diagn. Invest. 1996; 8: 304-330.
13. Arda, M., Minbay, A., Leloğlu, N., Aydın, N., Kahraman, M., Akay, Ö., İlgaz, A., İzgür, M., Diker, K.S.: Fakültatif Anaerobik Gram Negatif Çomaklar. Özel Mikrobiyoloji. N. Aydın (Ed.). No. 26, Medisan Yayın Serisi, Ankara, 1999.
14. Quinn, P.J., Carter, M.E., Markey, B., Carter, G.R.: Pasteurella Species. Clin. Vet. Microbiol. Wolfe Publ., Dublin, 254-259, 1994. 15. Dean, A.G., Dean, J.A., Coulombier, D., Brendel, K.A., Smith, D.C., Burton, A.H., Dicker, R.C., Sullivan, K.M./ Fagan, R.F., Arner, T.G.: Epi-Info, Version 6: A Word Processing, Database and Statistics Program for Epidemiology on Microcomputers. Center for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA, USA, 1994.
16. Hancock, R.D., Fallaneva, L.C.B., Riberio, L.A.O.: Pneumonic Pasteurellosis due to Pasteurella multocida in a Flock of Lambs in Brazil. Vet. Rec. 1991; 128: 154-155.
17. Ball, H.J., Connolly, M., Cassidy, J.: Pasteurella haemolytica Serotypes Isolated in Northern Ireland during 1989-1991. Br. Vet. J. 1993; 149: 561-570.
18. Dheerandra, N., Charan, K., Chattopadhyay, S.K.: Pathological Studies on .Caprine Pneumonia in Goats. Ind. Vet. J. 1991; 68: 216-220.
19. Sharma, R.K., Boro, B.R., Borah, P.: Incidence of Caprine Pneumonia and Associated Bacterial Species. Ind. J. Anim. Sci. 1991; 61: 54-55.
20. Özer, HL: Elazığ Yöresi Koyunlarında Görülen Pneumonia Şekilleri Üzerine Patolojik İncelemeler. F.Ü. Sağ. Bil. Derg. 1990; 4: 15-25.
21. Kaya, 0., Erganiş, 0.: Koyun ve Kuzu Pnömonileri Üzerinde Etiyolojik Survey. Veterinarium. 1991; 2: 27-29.
22. Kıran, M.M., Berkin, Ş. Kaya, 0., Dinçer, Z.: Konya Bölgesi Koyun Pnömonilerinde Patolojik ve Etiyolojik Araştırmalar. Selçuk Üniv. Vet. Fak. Derg. 1993; 9: 3-9.
23. Metin, N., Özer, H., Çiftçi, M.K.: Elazığ ve Çevresi Keçilerinde Pnömonilerin Yayılışı Üzerine Patolojik İncelemeler. Selçuk Üniv. Vet. Fak. Derg. 1988; 4: 231-237.
24. Yener, Z., Gürtürk, K., Gülbahar, Y., Solmaz, H.: Bitlis Mezbahasında Kesilen Keçilerde Pnömoni Olguları Üzerinde Patolojik ve Bakteriyolojik Çalışmalar. Vet. Bil. Derg. 2001; 17: 13-20.
25. Obasi, O.L., Raji, M.A., Adogwa, T., Natala, A.J.: The Effect of Climatic Factors on the Occurrence and Gross Pathological Lesions in Bacterial Pneumonia of Ovine and Caprine Hosts in Zaria, Nigeria. Global J. Pure Appl. Sci. 2001; 7: 57-60.
26. St. George, T.D.: Investigations of Respiratory Disease of Sheep in Australia. Aust. Vet. J. 1972; 48: 318-322.
27. Baysal, T., Güler, L.: Konya Yöresindeki Kuzu ve Oğlakların Enzootik Pnömonilerinden Bakteriyel Etken İzolasyonu. Veterinarium. 1992; 3: 1-5.
28. Güler, L.: Pnömonili Koyun ve Keçilerden Mikoplazmaların İzolasyonu, İdentifikasyonu ve Antibiyotiklere Duyarlılıklarının Belirlenmesi. S.Ü. Sağ. Bil. Enst, Doktora Tezi, 1993, Konya.
29. Güler, L, Baysal, T, Gündüz, K., Erganiş, 0., Kaya, O., Orhan, G.: Koyun ve Keçilerden İzole Edilen Pasteurella haemolytica Suşlarının Biyotip ve Serotiplendirilmesi. Veterinarium. 1996; 7: 5-12.
30. Hazıroğlu, R., Diker, K.S., Gülbahar, M.Y., Akan, M., Güvenç, T.: Studies of the Pathology and Microbiology of Pneumonic Lungs of Lambs. Dtsch. Tierarztl. Wschr. 1994; 101: 441-443.
31. Diker, K.S., Akan, M., Kaya, 0.: Evaluation of Immuhpgenicity of Pasteurella haemolytica Serotypes in Experimental Models. Turk. J. Vet. Anim. Sci., 2000; 24: 139-144.
32. Relman, D.A., Persing; D.H.: Genotypic Methods for Microbial Identification. In D.H. Persing (Ed.), PCR Protocols for Emerging Infectious Diseases: a Supplement to Diagnostic Molecular Microbiology: Principles and Applications. ASM Press, Washington, D.C., 3-31, 1996.
33. Lichtensteiger, C.A., Steenbergen, S.M., Lee, R.M., Poison, D.D., Vimr, E.R.: Direct PCR Analysis for Toxigenic Pasteurella multocida. J. Clin. Microbiol. 1996; 34: 3035-3039.
34. Hotzel, H., Erler, W., Schimmel, D.: Detection of Dermonecrotic Toxin Gene in Pasteurella multocida Strains Using Polymerase Chain Reaction. Berl. Munch. Tierarztl. Woch. 1997; 110: 139-142.
35. Nagai, S., Someno, S., Yagihashi, T.: Differentiation of Toxigenic from Nontoxigenic Isolates of Pasteurella multocida by PCR. j. Clin. Microbiol. 1994; 32: 1004-1010.
36. Kasten, R.W., Hansen, L.M., Hinojoza, J., Bieber, D., Ruehl, W.W., Hirsh, D.C.: Pasteurella multocida Produces a Protein with Homology to the P6 Outer Membrane Protein of Haemophilus influenzae. Infect Immun. 1995; 63: 989-993.
37. Nakai, T., Sawata, A., Tsuji, M., Küme, K.: Characterization of Dermonecrotic Toxin Produced by Serotype D Strains of Pasteurella multocida. Am. J. Vet. Res. 1984; 45: 2410-2413.
38. Foged, N.T.: Pasteurella multocida Toxin. The Characterization of the Toxin and Its Significance in the Diagnosis and Prevention of Progressive Atrophic Rhinitis in Pigs. 1992; APMIS 100 (Suppl. 25): 1-56.