Hüseyin Agah TERZİ, Özlem AYDEMİR, Engin KARAKEÇE, Mehmet Alpaslan KÖROĞLU, Mustafa ALTINDİŞ

Viral Ensefalit / Menenjit Şüpheli Hastalarda,Beyin Omurilik Sıvısı Örneklerinde Herpes Simplex Virüslerinin Real–Time PZR ile Araştırılması

Amaç: Aseptik menenjit ve ensefalit olarak iki genel kategorideincelenen santral sinir sistemi (SSS) enfeksiyonlarınınetiyolojisinde insan herpes virüslerinin önemli rolü vardır.Bu çalışmada, bölgemizde viral SSS enfeksiyonlarıdüşünülen olgulardan gönderilen beyin omurilik sıvısı (BOS)örneklerinde Herpes Simplex virüsü (HSV-1/2) sıklığı veincelenen BOS örneklerinin biyokimyasal özelliklerini ve aynızamanda bakteriyolojik kültür üremelerinin de irdelenmesiamaçlanmıştır.Materyal-Metot: Ocak 2016-Aralık 2017 tarihleri arasındalaboratuvarımıza gönderilen 110 adet BOS örneği çalışmakapsamında retrospektif olarak değerlendirildi. Artus® HSV½ QS-RGQ kiti ve Rotor-Gene Q 5Plex HRM (Qiagen,Hamburg, Almanya) real-time PZR sistemi kullanılarakBOS örnekleri HSV yönünden kalitatif olarak incelendi.BOS örneklerinde protein ve glukoz ölçüm değerleri dekaydedilmiştir. Ayrıca gönderilen BOS örneklerinin eşzamanlı olarak bakteriyolojik kültürleri de yapıldı.Bulgular: Laboratuvarımıza gönderilen örneklerin 5’inde(%4,5) HSV-1 pozitif saptanırken, hiçbir örnekte HSV-2 tespit edilmedi. BOS’un biyokimyasal parametrelerideğerlendirildiğinde; örneklerin 42’sinde (%38) BOS glukozdüzeyleri, 27’sinde ise (%25) ise BOS protein değerlerinormal düzeylerde saptandı. HSV-1 pozitif hastaların BOSglukoz düzeyi dördünde yüksek, protein düzeyi ise üç hastadayüksek bulundu. HSV ½ negatif olduğu tespit edilen 8 farklıörnekte kültürde üreme saptandı.Sonuç: SSS enfeksiyonlarında mortalite ve morbidite oranıyüksek olduğundan etkenin çok hızlı tanımlanması sonrasındaspesifik antiviral tedaviye başlanılması hayati öneme sahiptir.Herpes virüslerinin neden olduğu ensefalit vakaları iledaha sık karşılaşılsa da diğer viral ve bakteriyel etkenler deakılda tutulmalıdır. Bu nedenle bir örnekte çok sayıda viralve bakteriyel ajanın aynı anda ve kısa sürede saptanabildiğimultipleks PZR paneli gibi moleküler testlerin gerekliliği önplana çıkmaktadır.

Investigation of Herpes Simplex Virus by Real–Time PCR in Cerebrospinal Fluid Samples of the Patients with Suspected Viral Encephalitis and Meningitis

Objective: Human herpes viruses have an important role in the pathogenesis of the central nervous system (CNS) infections seperating two general category as aseptic meningitis and encephalitis. In this study we aimed to investigate the frequency of Herpes Simplex Virus (HSV- 1/2) in cerebrospinal fluid (CSF), biochemical specifications and also bacteriological culture of CSF samples in suspected cases of viral infections of CNS in our region. Material-Method: In this study, 110 CSF samples sent to our laboratory from patients with suspected CNS infection between January 2016- December 2017 were evaluated retrospectively. HSV-1/2 DNA presence was evaluated qualitatively with Real-time PCR technique by using Artus® HSV ½ QS-RGQ (Qiagen, Hamburg, Germany) kits on Rotor-Gene system (Qiagen, Hamburg, Germany). Also, protein and glucose levels in CSF samples were recorded. Furthermore bacteriological culture of CSF samples were evaluated simultaneously. Results: While, HSV-1 DNA was detected by nucleic acid testing in 5 of the 110 patients (4.5%), HSV-2 DNA was not detected. The CSF glucose and protein levels were found normal in 42 (38%) and 27 (25%) patients, respectively. The CSF glucose levels of the patients, who were found to be positive for HSV-1 were high in four patients. Also CSF protein levels in HSV-1 positive group were detected high in 3 patients. HSV ½ negative 8 different samples were detected positive in bacteriological culture. Conclusions: Because of the high mortality and morbidity rates in CNS infections, initiating of specific antiviral treatment after the rapid identification of the agent is crucial. Even though encephalitis caused by herpes viruses were seen more frequent, other viral and bacterial agents must be kept in mind. Therefore necessity of moleculer methods are taking over like multiplex PCR which detects multiplexed viral and bacterial agents at the same time and in a short time.

PDF

___

1. Us AD. Viral santral sinir sistemi enfeksiyonları. In: Us AD, Ergünay K, editörler. Moleküler, Klinik ve Tanısal Viroloji. Bilimsel Tıp Yayınevi, Ankara, 2012; s. 271-94.
2. Glaser CA, Gilliam S, Schnurr D, Forghani B, Honarmand S, Khetsuriani N, et al. In search of encephalitis etiologies: diagnostic challenges in the California Encephalitis Project,1998–2000. Clin Infect Dis 2003; 36(6): 731–42.
3. Hjalmarsson A, Blomqvist P, Skoldenberg B. Herpes simplex encephalitis in Sweden, 1990–2001: incidence, morbidity, and mortality. Clin Infect Dis 2007; 45(7): 875-80.
4. Delbue S, Tremolada S, Ferrante P. Application of molecular tools for the diagnosis of central nervous system infections. Neurol Sci 2008; 29(Suppl2): S283-5.
5. Boivin G. Diagnosis of herpesvirus infections of the central nervous system. Herpes 2004; (Suppl. 2): 48A-56A.
6. Nadelman CM, Newcomer VD. Herpes simplex virus infections. Postgrad Med 2000; 107(3): 189-200.
7. Tyler KL. Herpes simplex virüs infections of the central nervous system: encephalitis and meningitis, including Mollaret’s. Herpes 2004; (Suppl 2): 57A–64A.
8. Sili U, Kaya A, Mert A. Encephalitis Study Group. Herpes simplex virüs encephalitis: clinical manifestations, diagnosis and outcome in 106 adult patients. J Clin Virol 2014; 60(2): 112-8.
9. Bradshaw MJ, Venkatesan A. Herpes Simplex Virus-1 Encephalitis in Adults: Pathophysiology, Diagnosis, and Management. Neurotherapeutics 2016; 13(3): 493-508.
10. Kohl S. Herpes Simplex Virüs. In: Behrman RE, Kliegman RM, Jenson HB, editors. Nelson Textbook of Pediatrics. 17th ed. Philadelphia, Saunders Company, 2004; p. 1051-7.
11. Momméja-Marin H, Lafaurie M, Scieux C, Galicier L, Oksenhendler E, Molina JM. Herpes simplex virus type 2 as a cause of severe meningitis in immunocompromised adults. Clin Infect Dis 2003; 37(11): 1527-33.
12. Logan SA, MacMahon E. Viral meningitis. BMJ 2008; 336(7634): 36-40.
13. Ibrahim AI, Obeid MT, Jouma MJ, Roemer K, Mueller- Lantzsch N, Gärtner BC. Prevalence of Herpes Simplex Virus (Types 1 and 2), Varicella-Zoster Virus, Cytomegalovirus, and Human Herpesvirus 6 and 7 DNA in Cerebrospinal Fluid of Middle Eastern Patients with Encephalitis. J Clin Microbiol 2005; 43(8): 4172–4.
14. Gültepe B, Bayram Y, Güdücüoğlu H, Çıkman A, Berktaş M. Investigation of Bacterial and Viral Meningitis Agents with Different PCR Methods at a University Hospital. Abant Med J 2015; 4(2): 125-9.
15. Koskiniemi M, Rantalaiho T, Piiparinen H, von Bonsdorff CH, Färkkilä M, Järvinen A, et al. Study Group. Infections of the central nervous system of suspected viral origin: a collaborative study from Finland. J Neurovirol 2001; 7(5): 400-8.
16. Bhaskaran A, Racsa L, Gander R, Southern P, Cavuoti D, Alatoom A. Interpretation of positive molecular tests of common viruses in the cerebrospinal fluid. Diagn Microbiol Infect Dis 2013; 77(3): 236-40.
17. Studahl M, Hagberg L, Rekabdar E, Bergström T. Herpesvirus DNA detection in cerebral spinal fluid: differences in clinical presentation between alpha-, beta-, and gamma-herpesviruses. Scand J Infect Dis 2000; 32(3): 237- 48.
18. Garcia-Bardeci D, Pena MJ, Suárez-Bordón P, Aladro Y, Pérez-González C, Lafarga B. Value of the polymerase chain reaction in the diagnosis of herpes infections of the nervous system. Enferm Infecc Microbiol Clin 2004; 22(3): 150-5.
19. Kaşifoğlu N, Aslan M, Durmaz G, Us T. Santral sinir sistemi enfeksiyonlarında, herpes simplex virüs varlığının beyin omurilik sıvısı örneklerinde real–time PZR yöntemiyle araştırılması. Osmangazi Tıp Dergisi 2017; 39(3): 62-7.
20. Zeytinoğlu A, Altuğlu İ, Sayıner A, Şirin H, Sağduyu A, Erensoy S, ve ark. Herpes ensefalitinin beyin omurilik sıvısı örneklerinden polimeraz zincir reaksiyonu ile tanısı. Flora 2000; 5(3): 179-82.
21. Altuglu I, Zeytinoglu A, Sirin H, Yuceyar N, Erensoy S. Comparison of different polymerase chain reaction methods for detection of herpes simplex virus types 1 and 2 encephalitis. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2006; 25(10): 669-71.
22. Soylar M, Altuğlu I, Sertöz R, Aydın, D, Akkoyun F, Zeytinoğlu A. Ege Üniversitesi Hastanesi’ne başvuran santral sinir sistemi enfeksiyonu olgularında saptanan viral etkenler. Ege journal of medicine 2014; 53(2): 65-70.
23. Whitley RJ. Herpes simplex encephalitis: adolescents and adults. Antiviral Res 2006; 71(2-3): 141-8.
24. Pişkin N, Yalçın A, Aydemir H, Gürbüz Y, Tütüncü E, Türkyılmaz R. İkiyüz kırk dört erişkin santral sinir sistemi infeksiyonu olgusunun değerlendirilmesi. Flora 2005; 10(4): 119-24.
25. Beckham JD, Tyler KL, editors. Encephalitis. Mandell, Douglas, and Bennett’s Principles and Practice of Infectious Diseasea, 7th ed. 2010, p. 1244.vv