Aris ÇAKİRİS, Atilla CAKAR, Neslihan ABACI, Sema EKMEKCİ, Zeliha EMRENCE, Duran ÜSTEK

293T İnsan Renal Hücrre Dizisinde LPS Konsantrasyonlarının Yeniden Değerlendirilmesi

Amaç: Hücrelerin LPS (Lipopolisakkarit)’ye enflamatuvaryanıtları in-vitro deneylerde sıklıkla kullanılmaktadır. Buna rağmen hücre kültürü çalışmaları için LPS ’nin doğru dozunun belirlenmesinde zorluklarla karşılaşılmaktadır. Maksimum yanıt veren LPS konsantrasyonunun belirlenmesi in vitro enflamatuvar deneyler için kritik bir noktadır. Bu çalışmanın amacı LPS’nin 293T insan renal hücre dizisindeki konsantrasyon bağımlı etkisinin yeniden değerlendirilmesidir.Yöntem: Bu çalışmada LPS ile stimule edilmiş 293T hücre hattı Xcelligence Real-Time Cell Analyzer (RTCA) sisteminde incelendi. LPS ’nin artmış konsantrasyonlarının 293T hücre hattı üzerindeki etkisi RTCA cihazında hücre proliferasyonu ölçümleri yapılarak araştırıldı.Bulgular: Sonuçlarımıza göre 2, 4 ve 8 μg’lık LPS konsantrasyonlarını hücre bölünmesini inhibe ederek hücreleri kararlı duruma yönlendirdiğini gösterdi. 1 μg ’lık LPS konsantrasyonu hücreleri mitotik faza sürüklerken daha düşük LPS konsantrasyonlarının ise hücre proliferasyonu üzerinde bir etki göstermedi.Sonuç: Bu çalışmadaki sonuçlara göre LPS konsantrasyonlarının hücre proliferasyonu üzerinde farklı etkilerinin olduğu ve deneysel çalışmalardan önce LPS konsantrasyonlarının optimize edilmesi gerektiği gösterilmiştir.

Anahtar Kelimeler:

lipopolisakkarit, LPS, hücre proliferasyonu, enflamasyon

Re-evaluation Of LPS Concentrations On The 293T Human Renal Cell Line

Objective: The inflammatory responsiveness of the cells to Lipopolysaccharides (LPS) is commonly used for in vitro experiments. However, the correct dose of the LPS for cell line experiments is elusive. The LPS concentration that gives the maximal response is a critical point of in vitro inflammatory experiments. The aim of this study was to reevaluate the concentration dependent effect of LPS on the 293T human renal cell line.Methods: We evaluated the cell-detachment assay of LPS-stimulated 293T cell line monitored by xCELLigence Real-Time Cell Analyzer (RTCA) system. We applied increasing concentration of LPS followed by Roche xCELLigence Instrument based on the Real-Time Cell Analysis System.Results: Our results demonstrated that the 2, 4 and 8μg of LPS inhibit cell division which diverts cells to a steady-state phase, 1 μg acts as mitogen. Lower concentrations are no effect on cells.Conclusion: These work showed that LPS concentrations had various effects on cell proliferation and need to be estimated for each experiment before carry out the experiments.

Keywords:

Lipopolysaccharides, LPS, cell proliferation, inflammation,

PDF

___

Ruiz N, Kahne D, Silhavy T.J. Transport of lipopolysaccharide across the cellenvelope: the long road of discovery. Nat Rev Microbiol. 2009; 7(9): 677–683.
Fumarola D., Jirillo E J. Contamination of con Apreperations. Immunol. 1976.116:1197.
Fumarola D., Jirillo E J.Endotoxin contamination of some commercial preparationused in experimental research. Biomedical applications 1979.29:379-385.
Fumarola,D.,E. Jirillo,G.Miragliotta,and E. Magliulo. Influence oflipopolysaccharide from.Pasteurellamultocida on fibroblasts cultured in vitro. IRCSMed Sci. 1982; 10: 647-648
Del Liano, A.M. and.Lavergne, J.A.Submitogenic doses of lipopolysaccharide alter the patterns of nuclear granularity and cell proliferation in human mixed lymphocyte cultures. Transplantation Proceedings. 1991. 23:1766-1770.
Abassi YA, Xi B, Zhang W, et al. Kinetic cell-based morphological screening:prediction of mechanism of compound action and off-target effects. ChemBiol2009;16(7):712-23.
Kulahava TA, Semenkova GN, Kvacheva ZB, et al. Effects of peroxynitrite andlipopolysaccharide on mitotic activity of C6 glioma cells.NeurosciLett. 2006;398(3):286-90.
Moore RN, Steeg PS, Männel DN, Mergenhagen SE. Role of lipopolysaccharide inregulating colony-stimulating factor-dependent macrophage proliferation in vitro.Infect Immun. 1980 ;30(3):797-804.