MUSA KARAMAN, MEHMET ÇİTİL, EMİN KARAKURT, ÖZGÜR ÇELEBİ, Fatih BÜYÜK, ABDURRAHMAN GÜRBÜZ, HASAN ÖZEN, SERPİL DAĞ

Immunohistochemical and Molecular Detection of Mannheimia spp. and Pasteurella spp. in Sheep with Pneumonia in Kars Province - Turkey

Bu çalışmada Kafkas Üniversitesi Veteriner Fakültesine 2011-2013 yılları arasında pnömoni şüphesi ile getirilen koyunların akciğerlerinde Mannheimia haemolytica ve Pasteurella multocida etkenlerinin varlığı immunohistokimyasal ve bakteriyolojik yöntemlerle araştırılmıştır. Çalışma materyalini pnömoni şüpheli 100 adet koyun akciğeri oluşturdu. Akciğer doku örnekleri rutin histopatolojik incelemelerin ardından her iki etkene karşı hazırlanan antikorlar kullanılarak immunohistokimyasal olarak boyandı. Bakteriyolojik incelemeler için alınan örneklerin %7 koyun kanlı agar ve Mc Conkey agara ekimleri yapıldı. Aerobik koşullarda 24-48 saat inkübasyonu takiben şüpheli koloniler Pasteurella ve Mannheimia türleri açısından incelendi. Histopatolojik incelemeler sonucunda pnömonilerin %28'i fibrinli bronkopnömoni, %21'i prulent bronkopnömoni, %20'si akut-kataral bronkopnömoni, %18'i intersitisyel pnömoni, %11'i verminöz pnömoni ve %2'si adenomatöz pnömoni olarak sınıflandırıldı. Bakteriyolojik incelemeler sonucunda 19 koyunda Mannheimia haemolytica ile 3 vakada Pasteurella multocida tespit edilirken bu oranlar immunohistokimyasal incelemelerde sırasıyla 17 ve 2 olarak belirlendi. PZR analizleri hem Mannheimia haemolytica hem de Pasteurella multocida için mikrobiyolojik analizler ile paralellik gösterirdi. Çalışmanın sonucunda Kars ilindeki koyun pnömoni vakalarında Mannheimia haemolytica'nın önemli derece yer aldığı buna karşın Pasteurella multocida'nın da az sayıda olmakla beraber pnömoni etkeni olarak görev yaptığı belirlendi

Kars İlinde Pnömonili Koyunlarda Mannheimia spp. ve Pasteurella spp.’nin İmmunohistokimyasal ve Moleküler Tanımlanması

In this investigation, presence of Mannheimia haemolytica and Pasteurella multocida in sheep brought to Kafkas University Faculty of Veterinary Medicine between 2011 and 2013 with a suspicion of pneumonia was studied by immunohistochemical and bacteriological methods. Study materials were 100 sheep lungs. After routine histopathological investigations lungs were immunohistochemically stained with antibodies prepared against both of the agents. In bacteriological investigations, tissue samples were inoculated into 7% sheep blood agar and Mc Conkey agar and incubated for 24-48 h in aerobic conditions, and the suspected colonies were evaluated for Mannheimia and Pasteurella species. In histological investigations, pneumonias were classified as 28% fibrinous bronchopneumonia, 21% prulent bronchopneumonia, 20% acute-catharal bronchopneumonia, 18% interstitial pneumonia, 11% verminous pneumonia and 2% adenomatous pneumonia. In bacteriological investigations Mannheimia haemolytica and Pasteurella multocida was detected in 19 and 3 cases, respectively, these numbers were 17 and 2, respectively in immunohistochemical investigations. The results of PCR analysis for both Mannheimia haemolytica and Pasteurella multocida paralleled with the findings of microbiological culture. The results of the study showed that Mannheimia haemolytica is an important cause of pneumonia in sheep in Kars, and Pasteurella multocida, although with lesser importance can cause pneumonia in this species

PDF

___

1. Ackerman MR, Brogden KA: Response of ruminant respiratory tract to Mannheimia (Pasteurella) haemolytica. Microbes Infect, 2 (9): 1079- 1088, 2000. DOI: 10.1016/S1286-4579(00)01262-4
2. Barbour EK, Nabbut NH, Hamadeh SK, Al-Nakhli HM: Bacterial identity and characteristics in healthy and unhealthy respiratory tracts of sheep and calves. Vet Res Commun, 21 (6): 421-430, 1997. DOI: 10.1023/ A:1005855318665
3. Davies DH: Aetiology of pneumonia of young sheep. Preg Vet Microbiol Immun, 1, 229-248, 1985.
4. Özen H, Karaman M, Şahin M, Özcan K: Pnömonili Sığırlarda Mycoplasma bovis, M. dispar, M. bovirhinis ve M. mycoides subsp. mycoides (küçük koloni tipi)’in PZR ile belirlenerek patolojik bulguların incelenmesi. Kafkas Univ Vet Fak Derg 15 (1): 125-133, 2009. DOI: 10.9775/ kvfd.2008.108-A
5. Binns SH, Cox IJ, Rizvi S, Gren LE: Risk factors for lamb mortality on UK sheep farms. Prev Vet Med, 52 (3-4): 287-303, 2002. DOI: 10.1016/ S0167-5877(01)00255-0
6. Gökçe E, Erdoğan HM: Neonatal kuzularda pnömoni: Yaygınlığı ve etki eden kimi risk faktörleri. Kafkas Univ Vet Fak Derg, 14 (2): 223-228, 2008. DOI: 10.9775/kvfd.2008.58-A
7. Kaya O, Erganiş O: Koyun ve kuzu pnömonileri üzerinde etiyolojik survey. Veterinarium, 2 (3-4): 27-29, 1991.
8. Özbey G, Muz A: Pnömonili koyun ve keçilerin akciğerlerinden aerobik bakteri izolasyonları ve izole Pasteurella multocida ve Mannheimia haemolytica’nın polimeraz zincir reaksiyonu ile saptanması. Turk J Vet Anim Sci, 28, 209-261, 2004.
9. Mohamed RA, Abdelsalam EB: A review on pneumonic pasteurellosis (respiratory mannheimiosis) with emphasis on pathogenesis, virulence mechanisms and predisposing factors. Bulg J Vet Med, 11 (3): 139-160, 2008.
10. Quinn PJ, Markey B, Carter ME, Donelly WS, Leonard FC: Veterinary Microbiology and Microbial Disease. Blackwell Science, 137-143, 2002.
11. Ewers C, Luebke-Becker A, Wieler: Mannheimia haemolytica and the pathogenesis of enzootic bronchopneumonia. Berl Munch Tieraerztl Wochensch, 117, 97-115, 2004.
12. Milli UH, Hazıroglu R: Veteriner Patoloji. Cilt 2, s. 80-85. Tamer Matbaacılık, Ankara, 1997.
13. Catry B, Baele M, Opsomer G, de Kruif A, Decostere A, Haesbrouck F: tRNA- intergenic spacer PCR for the identification of Pasteurella and Mannheimia spp. Vet Microbiol, 98, 251-260, 2004. DOI: 10.1016/j. vetmic.2003.10.027
14. Sathiamoorthy S, Shewen PE, Hodgins DC, Lo RYC: In vivo gene expression in Mannheimia haemolytica A1 during a time-course trial in the ovine host. Vet Microbiol, 158, 163-171, 2012. DOI: 10.1016/j. vetmic.2012.01.033
15. Gürbüz A, Şahin M: Sığır ve koyunlara ait pnömonili akciğerlerden Pasteurella haemolytica’nın izolasyonu, identifikasyonu, biyotiplendirilmesi ve antibiyotiklere olan duyarlılıklarının belirlenmesi. Kafkas Univ Vet Fak Derg, 9 (2): 169-175, 2003.
16. Tel OY, Keskin O: Koyun akciğerlerinden Pasteurella multocida ve Mannheimia haemolytica izolasyonu ve antibiyotiklere duyarlılığı. YYU Vete Fak Derg, 21 (1): 31-34, 2010.
17. İlhan Z, Keleş İ: Biotyping and serotyping of Mannheimia (Pasteurella) haemolytica isolated from lung samples of slaughtered sheep in the Van Region. Turk J Vet Anim Sci, 31 (2): 137-141, 2007.
18. Solmaz H, İlhan Z: Pnöymonili koyun akciğerlerinden izole edilen Mannheimia haemolytica izolatlarının bazı antibiyotiklere in vitro duyarlılıklarının belirlenmesi. Avkae Dergisi, 1, 15-18, 2011.
19. Oruç E: The pathologic and bacteriologic comparison of pneumonia in lambs. Turk J Vet Anim Sci, 30, 593-599, 2006.
20. Beytut E, Otlu S, Sözmen M: Kars Bölgesi koyunlarında gözlenen pnömoniler üzerine patolojik ve etiyolojik incelemeler. Kafkas Univ Vet Fak Derg, 8 (1): 31-39, 2002.
21. Poulsen LL, Reiner TM, Rikke LS, Bisgaard M, Christensen H, Olsen JE, Stuen S, Bojesen AM: Occurrence of haemolytic Mannheimia spp. in apparently healthy sheep in Norway. Acta Vet Scand, 48, 19, 2006. DOI: 10.1186/1751-0147-48-19
22. Marru HD, Anijajo TT, Hassen AA: A study on ovine pneumonic pasteurellosis: Isolation and identification of Pasteurellae and their antibiogram susceptibility pattern in Haramaya District, Eastern Hararghe, Ethiopia. BMC Vet Res, 9, 23, 2013. DOI: 10.1186/1746-6148-9-239
23. Berhe K, Weldeselassie G, Bettridge J, Christley RM, Abdi RD: Small ruminant pasteurellosis in Tigray region, Ethiopia: Marked serotype diversity may affect vaccine efficacy. Epidemiol Infect, 145 (7): 1326- 1338, 2017. DOI: 10.1017/S095026881600337X
24. Shanthalingam S, Goldy A, Bavananthasivam J, Subramaniam R, Batra SA, Kugadas A, Raghavan B, Dassanayake RP, Jennings-Gaines JE, Killion HJ, Edwards WH, Ramsey JM, Anderson NJ, Wolff PL, Mansfield K, Bruning D, Srikumaran S: PCR assay detects Mannheimia haemolytica in culture-negative pneumonic lung tissues of bighorn sheep (Ovis canadensis) from outbreaks in the western USA, 2009-2010. J Wildl Dis, 50 (1): 1-10, 2014. DOI: 10.7589/2012-09-225
25. Yener Z, İlhan F, İlhan Z, Sağlam YS: Immunohistochemical detection of Mannheimia (Pasteurella) haemolytica antigens in goats with natural pneumonia. Vet Res Commun, 33, 305-313, 2009. DOI: 10.1007/ s11259-008-9178-z
26. Haritani M, Nakazawa M, Oohashi S, Yamada Y, Hazıroğlu R, Narita M: Immunperoxidase evaluation of pneumonic lesions induced by P. haemolytica in calves. Am J Vet Res, 48, 1358-1362, 1987.
27. Hazıroğlu R, Diker KS, Turkarslan J, Gülbahar MY: Detection of Mycoplasma ovipnomoniae and Pasteurella haemolytica antigens by an immunoperoxidase technique in pneumonic ovine lungs. Vet Pathol, 33 (1): 74-76, 1996. DOI: 10.1177/030098589603300108
28. Özyıldız Z, Tel OY, Yılmaz R, Yurdagül Özsoy Ş, Keskin O: Pathological and microbiological investigations of pneumonic Pasteurellosis in sheep. Kafkas Univ Vet Fak Derg, 19 (1): 103-108, 2013. DOI: 10.9775/ kvfd.2012.7281
29. Bemani E, Esmaeilzadeh S, Gharibi D, Ghorbanpoor M: Immuno histochemical and bacteriological investigations of Mannheimia haemolytica in sheep bronchopneumonia. Kafkas Univ Vet Fak Derg, 23 (1): 7-14, 2017. DOI: 10.9775/kvfd.2016.15679
30. Quinn PJ, Carter ME, Markey B, Carter GR: Clinical Veterinary Microbiology, Wolfe Publication, London, UK, 1999.
31. Koneman EW, Allen SD, Janda WM, Schreckenberger PC, Winn WC: Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology, 5th edn., Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, 1997.
32. Kamp EM, Bokken GCAM, Vermeulen TMM, deJong MF, Buys HECM, Reek FH, Smits MA: A specific and sensitive PCR assay suitable for large-scale detection of toxigenic Pasteurella multocida in nasal and tonsillar swabs specimens of pigs. J Vet Diagn Invest, 8 (3): 304-309, 1996. DOI: 10.1177/104063879600800305
33. Guenther S, Schierack P, Grobbel M, Lübke-Becker A, Wieler LH, Ewers C: Real-time PCR assay for the detection of species of the genus Mannheimia. J Clin Microbiol, 75 (1): 75-80, 2008. DOI: 10.1016/j. mimet.2008.05.008
34. Kırkan Ş: Aydın Yöresinde Koyunların Solunum Sisteminde İnfeksiyon Nedeni Mannheimia (Pasteurella) haemolytica’nın Biyotip ve Serotip Tayini, Elektroforez ve PCR İle Tanısı. Doktora Tezi, Adnan Menderes Üniv. Sağlık Bil. Enst., 2003.
35. Hazıroğlu R, Diker KS, Gülbahar MY, Akan M, Güvenc T: Studies of the pathology and microbiology of pneumonic lungs of lambs. DTW, 101, 441-443, 1994.
36. Townsend KM, Hanh TX, Boyle DO, Wilkie I, Phan TT, Wijewardana TG, Trung NT, Frost AJ: PCR detection and analysis of Pasteurella multocida from the tonsils of slaughtered pigs in Vietnam. Vet Microbiol, 72, 69-78, 2000. DOI: 10.1016/S0378-1135(99)00188-1
37. Kılıç A, Muz A: Pnömonili sığır akciğerlerinden bakteri izolasyonları ve izole Pasteurella’ların Polimeraz Zincir Reaksiyonu ile saptanması. Turk J Vet Anim Sci, 28, 217-223, 2004.
38. Slocombe RF, Malark J, Ingersoll R, Derksen FJ, Robinson NE: Importance of neutrophils in the pathogenesis of acute pneumonic pasteurellosis in calves. Am J Vet Res, 46, 2253-2258, 1985.