Funda DOĞRUMAN AL, Gülcan ADIYAMAN, Tuğçe Nil YANTIRA, Süheyla HASGÜR, EMİN ÜMİT BAĞRIAÇIK

Anti-paraziter Etkili İlaçların Blastocystis İzolatlarının Canlılıkları Üzerine Etkilerinin MTT Testi ile Belirlenmesi

Blastocystis spp., tüm dünyada sık görülen bir protozoon parazittir. Blastosistozun tedavisinde metronidazol yaygın olarak kullanılan ilaçlar arasındadır. Son zamanlarda bazı hastalarda metronidazol tedavisinde başarısızlık olduğu tespit edildiği bildirilmiştir. Bu durum metronidazole karşı direncin ortaya çıktığını düşündürmektedir. Bu çalışmada ornidazol, siprofloksasin, trimetoprim-sülfametoksazol (TMP-SMX) ve metronidazolün Blastocystis türlerinin canlılıkları üzerine etkilerinin araştırılması amaçlanmıştır. İlaçlara karşı parazit canlılığının belirlenmesi amacıyla MTT yöntemi (Cell Proliferation Kit MTT, Roche, USA) kullanılmıştır. Üç olgunun dışkılarında mikroskobik olarak nativ-lugol inceleme ile tespit edilen Blastocystis spp. (A,B,C) izolatları kültür ortamına inoküle edilmiştir. Daha sonra parazitler antibiyotik ve antifungal içeren yeni bir kültür ortamına aktarılmıştır. Kültür ortamı bakteriyel kontaminasyonun kontrolü için mikrobiyolojik besiyerlerine ekilerek inkübe edilmiştir. İlaçların seri dilüsyonları 96 kuyulu mikroplaklarda hazırlanmış ve parazit hücreleri her bir kuyucuğa eklenmiştir. Her üç suşun kullanılan ilaçlara karşı farklı direnç profili gösterdiği belirlenmiştir. A suşunun canlılığı üzerine siprofloksasin en etkili ilaç olduğu belirlenirken, C suşuna TMP-SMX ve ornidazolün etkisinin yüksek olduğu tespit edilmiştir. B suşunun canlılığının ise kullanılan tüm ilaç konsantrasyonlarından etkilenmediği gözlenmiştir. Bu çalışmada blastosistozda etkin tedavi uygulayabilmek için geliştirilecek standart bir anti-paraziter ilaç duyarlılık testine gereksinim duyulduğu sonucuna varılmıştır

Determination of the Effects of Anti-parasitic Drugs on the Viability of Blastocystis Strains Via MTT Assay

Blastocystis spp., a protozoan parasite are common around the world. Metronidazole has been commonly used in treatment of Blastocystosis. Recently it has been reported that metronidazole treatment failed in some patients. Therefore, this finding would be related to resistance to metronidazole. This study aims to investigate viability of Blastocystis spp. following treatment with ornidazole, ciprofloxacin, and trimetroprim-sulfamethoxazole (TMP-SMX) and metronidazole. Viability of the parasite was measured using MTT assay (Cell Proliferation Kit MTT, Roche, USA). Stool samples from three cases where Blastocystis spp. (A,B,C) had been detected in nativelugol examinations were incubated in culture medium. Then the parasites were transferred into a fresh medium containing antibiotics and antifungals. Microbiological culture mediums were used checking for bacterial contamination. On a 96- well microplate, serial dilutions of drugs were prepared and parasites were added into wells. The resistance behaviour of every strains was differentiated. While ciprofloxacin was the most powerful anti-parasitic drug on the viability of strain A, TMP-SMX and ornidazole were highly effective on strain C. Viability of strain B was not to affected by concentration of the drugs. We concluded that standardized sensitivity test for anti-parasitic drugs was needed for effective treatment of Blastocystosis

___

Tan KS: New insights on classification, identification, and clinical relevance of Blastocystis spp. Clin Microbiol Rev, 21 (4): 639-665, 2008.

Mirza H, Teo JDW, Upcroft J, Tan KSW: A rapid, high-throughput viability assay for Blastocystis spp. reveals metronidazole resistance and extensive subtype-dependent variations in drug susceptibilities. Antimicrob Agents Chemother, 55 (2): 637-648, 2011.

Alver O, Öztüfekçi A, Kurt E, Özakın C, Töre O: Akciğer kanserli bir hastada Blastocystis hominis. Turkiye Parazitol Derg, 28 (4): 199-201, 2004.

Garcia LS: Blastocystis hominis, Intestinal protozoa: Amebae. In, Garcia LS (Ed): Diagnostic Medical Parasitology. 5th ed., pp. 6-32, ASM press, Washington, 2007.

Dogruman-Al F, Simsek Z, Boorom K, Ekici E, Sahin M, Tuncer C, Kustimur S, Altinbas A: Comparison of methods for detection of Blastocystis infection in routinely submitted stool samples, and also in IBS/IBD Patients in Ankara, Turkey. PLoS ONE, 5 (11): e15484, 2010.

Ica T, Çiftçi A, Savaşan S, Diker KS: Metronidazole resistance of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli from different animal species. Kafkas Univ Vet Fak Derg, 15 (4): 629-632, 2009.

Haresh K, Suresh K, Khairul Anuar A, Saminathan S: Isolate resistance of Blastocystis hominis to metronidazole. Trop Med Int Health, (4): 274-277, 1999.

Moghaddam DD, Ghadirian E, Azami M: Blastocystis hominis and the evaluation of efficacy of metronidazole and trimethoprim/ sulfamethoxazole. Parasitol Res, 96, 273-275, 2005.

Stensvold CR, Smith HV, Nagel R, Olsen KE, Traub RJ: Eradication of Blastocystis carriage with antimicrobials: Reality or delusion. J Clin Gastroenterol, 44 (2): 85-90, 2010.

Yakoob J, Jefri W, Jafri N, Islam M, Asim Beg M: In vitro susceptibility of Blastocystis hominis isolated from patients with irritable bowel syndrome. Br J Biomed Sci, 61 (2): 75-77, 2004.

Hamamcı B, Yazar S, Şahin İ: Blastocystis hominis'in in vitro kültürü ve antiprotozoal ilaçların in vitro etkilerinin araştırılması. Erciyes Üniv Sağlık Bil Derg, 13 (1): 7-15, 2004.

Ok UZ, Girginkardeşler N, Balcioğlu C, Ertan P, Pirildar T, Kilimcioğlu AA: Effect of trimethoprim-sulfamethaxazole in Blastocystis hominis infection. Am J Gastroenterol, 94 (11): 3245-3247, 1999.

Zierdt CH, Swan JC, Hosseini J: In vitro response of Blastocystis hominis to antiprotozoal drugs. J Protozool, 30 (2): 332-334, 1983.

Dunn LA, Boreham PF: The in-vitro activity of drugs against Blastocystis hominis. J Antimicrob Chemother, 27 (4): 507-516, 1991.

Ertuğ S, Dost T, Ertabaklar H, Gültekin B: Blastocystis hominis infeksiyonunda trimethoprim sülfametoksazolün etkisi. Turkiye Parazitol Derg, 33 (4): 270-272, 2009.

Sawangjaroen N, Sawangjaroen K: The effects of extracts from anti- diarrheic Thai medicinal plants on the in vitro growth of the intestinal protozoa parasite: Blastocystis hominis. J Ethnopharmacol, 98 (1-2): 67-72,

Grabensteiner E, Liebhart D, Arshad N, Hess M: Antiprotozoal activities determined in vitro and in vivo of certain plant extracts against Histomonas meleagridis, Tetratrichomonas gallinarum and Blastocystis sp. Parasitol Res, 103 (6): 1257-1264, 2008.

Yakoob J, Abbas Z, Beg MA, Naz S, Awan S, Hamid S, Jafri W: In vitro sensitivity of Blastocystis hominis to garlic, ginger, white cumin, and black pepper used in diet. Parasitol Res, 109 (2): 379-385, 2011.

Yoshikawa H, Dogruman-Ai F, Turk S, Kustimur S, Balaban N, Sultan N: Evaluation of DNA extraction kits for molecular diagnosis of human Blastocystis subtypes from fecal samples. Parasitol Res, 109 (4): 1050, 2011.