Oryctolagus cuniculus Kimozin Enzimini Pichia pastoris Mayasında İfade Edecek Vektörün Dizayn ve Jenerasyonu

Bu çalışmada rekombinant tavşan pro-kimozin genini üretmek amacıyla kullanılacak olan pPIC9K-Chy vektörünün dizayn edilmesi ve çoğaltılması hedeflenmektedir. DNA bilgi bankalarında biyoinformatik analizler yapılarak tavşan pro-kimozin gen dizilimi belirlenmiştir. Elde edilen dizilimlere göre dizayn edilen primerler ile tavşandan genomundan kimozin enzimi izole edilmiştir. Hedef DNA sekansları PIC9K vektörüne EcoRI ve NotI restriksiyon enzimleriyle üzerinden klonlanmıştır. Klonlama işlemi sonrasında hedef geni içeren vektör, JM109 kompetent E. coli hücrelerine ısı şoku uygulamasıyla transforme edilmiş ve antibiyotikli besiyerinde seçilimleri gerçekleştirilmiştir. Antibiyotik pozitif olan tek kolonilerin hedef geni taşıyıp taşımadıkları koloni PZR yöntemiyle doğrulanmış ve E. coli hücrelerinden plazmid DNA’lar ekstrakte edilmiştir. Elde edilen plazmid DNA' lar elektroporasyon yöntemi ile Pichia pastoris kompetent maya hücrelerine aktarılmış ve aktarılan hücreler çeşitli konsantrasyonlarda antibiyotik içeren besi yerlerine ekilerek hedef geni taşıdıkları doğrulanmıştır.

___

  • [1].Flamm, E.L., ''How FDA approved chymosin: A case history'', Nature Biotechnology, 9: 349–351, 1991.[2]. Foltmann, B., Pedersen V. B., Jacobsen M., Auffman, D., Wijbrandt G., ''The complete amino acid sequence of prochymosin'', Proc. Nat. Acad. Sci., 74: 2321–4, 1977.[3]. Houen, G., Madsen, M.T., Harlow, K.W., Lønblad, P., Foltmann, B., ''The primary structure and enzymic properties of porcine prochymosin and chymosin'' Int J Biochem Cell Biology. 28(6):667-675, 1996.[4]. Mohanty, A. K., Mukhopadhyay, U. K., Kaushık, J. K., Grover, S., and Batısh, V. K., ''Isolation, purification and characterization of chymosin from riverine buffalo (Bubalus bubalis)'', Journal of Dairy Research, 70(01): 37- 43, 2003.[5]. Rogelj, I., Perko, B., Francky, A., Penca, V., and Pungerčar, J.,'' Recombinant lamb chymosin as an alternative coagulating enzyme in cheese production'', Journal of dairy science, 84(5): 1020-1026, 2001.[6]. Vega-Hernández, M. C., Gómez-Coello, A., Vıllar, J., and Claverıe-Martı́n, F., ''Molecular cloning and expression in yeast of caprine prochymosin'', Journal of biotechnology, 114(1): 69-79, 2004.[7]. Kappeler, S. R., Van Den Brink, H. J., Rahbek- Nielsen, M., Farah, Z., Puhan, Z., Hansen, E., Johansen, E., ''Characterization of recombinant camel chymosin reveals superior properties for the coagulation of bovine and camel milk'', Biochem. Biophys. Res. Commun, 342: 647−654, 2006.[8]. Rao, S., Dutta, S.M., ''Extraction of rennet from abomasum of suckling buffalo calves'', Ind J Dairy Sci., 34 (2): 235–237, 1981.[9]. Manıatıs, T., Frıtsch, E. F., and Sambrook, J., ''Molecular cloning''. A laboratory manual Cold Spring Harbor Laboratory, New York. 545, 1982.
Harran Üniversitesi Mühendislik Dergisi-Cover
  • Yayın Aralığı: Yılda 3 Sayı
  • Başlangıç: 2016
  • Yayıncı: Harran Üniversitesi
Sayıdaki Diğer Makaleler

Veri Madenciliği Yöntemleri İle Meteorolojik Verilerden Kayıp Güneş Işınım Değerlerinin Tahmini

Duygu SAĞALTICI, Fatma Didem ALAY, Cihan EFİL, Nagehan İLHAN

Yapılarda Isıtma ve Soğutma Yükü Sınıfların Makine Öğrenme Yöntemleri ile Belirlenmesi

Abdülkadir GÜMÜŞÇÜ, Mehmet Emin TENEKECİ, Nurettin BEŞLİ, Mehmet Akif İLKHAN, Emrah ASLAN, Sami ABAMOR

Atıksu Arıtma Tesislerinde Enerji Kazanımı için Mikro Ölçekte Hidroelektrik Santrallerin Uygulanabilirliği

Dilek ERKAN, Tülay YILMAZ, Amine YÜCEL, Ahmet YILMAZ, Ahmet TEL, Deniz UÇAR

Şehir Şehirleşme ve Şehirli Algısının Evrensel Vasıflarıyla Sürdürülebilirliği İçin, Kentsel Dönüşüm, Coğrafi Bilgi Sistemleri Ve Geotasarım Teknolojileri

Saffet ERDOĞAN, Recep ASLAN

Farklı Yapıya Sahip Seralar için Isıtma İhtiyacının Belirlenmesi

Ertaç HÜRDOĞAN, Gamze ERDOĞAN SALTAN, Kamil Neyfel ÇERÇİ, Osman KARA, Coşkun ÖZALP

Farklı Tip Güneş Kollektörlerinin Isıl Verim Değerlerinin Hesapsal Zekâ Yöntemleriyle Tahmin Edilmesi

Mehmet DAŞ, Ebru KAVAK AKPINAR

Oryctolagus cuniculus Kimozin Enzimini Pichia pastoris Mayasında İfade Edecek Vektörün Dizayn ve Jenerasyonu

SELİN ALİHANOĞLU, Meral ATLI, Hasan VARDİN, Mehmet KARAASLAN

Titreşimlerin Yapılardaki Kullanıcı Konforuna Etkisinin İncelenmesi

Muhammed Emin IŞIK, Ali Osman KURUŞÇU

İki Amaçlı Gazeteci Çocuk Problemine Bulanık Bir Yaklaşım

Ahmet ÖĞÜTLÜ, Servet HASGÜL

Tarımsal Veri Analizlerinin Veri Madenciliği ile Yapılması

İbrahim AYDİLEK, Yunus SANDIKÇI