Yahya GÜL, Şükrü Nail GÜNER, İsmail REİSLİ, Sevgi KELEŞ, Ercan KURAR, Hatice İrem EFE, Hasan KAPAKLI, Mehmet Ali KARASELEK

CD19 Eksikliği Tanısında RFLP Yönteminin Kullanımı

B lenfosit yüzeyinde bulunan CD19 molekülü olgun B hücrelerinde CD21, CD81, CD225 ile birlikte CD19 kompleksini oluşturur ve antijen uyarısı ile birlikte B lenfosit aktivasyonunu düzenler. CD19 molekülünü kodlayan gende oluşacak mutasyonlar, CD19 protein ekspresyonunu etkilemekte ve primer immün yetmezlik (PIY) tablosu ortaya çıkmaktadır. Bu çalışmada CD19 eksikliği tanısıyla izlediğimiz hastamızın 3 aylık bebeğinin, RFLP yöntemiyle aynı gen mutasyonu yönünden değerlendirilmesi amaçlanmıştır. Çalışmaya bilinen CD19 mutasyonlu hasta, bu hastanın yeni doğan bebeği ile hastanın annesi ve iki sağlıklı kontrol dahil edilmiştir. Mutasyon analizi için ilk olarak CD19 genindeki mutasyon bölgesini kapsayan primerler dizayn edilip PZR-RFLP işlemi gerçekleştirilmiştir. Oluşan DNA fragmentleri agaroz jel elektoroforezinde görüntülenip genotiplemesi yapılmıştır. Hastamızın CD19 geninin ekzon 6’da saptanan çerçeve kayması mutasyonu (c.973_973insA) yönünden bebeğinin ve annesinin taşıyıcı olduğu PZR-RFLP yöntemi ile gösterilmiştir. PZR-RFLP yönteminin, bilinen mutasyonların belirlenmesinde kullanılabilecek ucuz, hızlı ve güvenilir bir yöntem olduğu kanısındayız.

The Use of RFLP Method in the Diagnosıs of CD19 Deficiency

CD19 molecule on the B lymphocyte surface forms the CD19 complex together with CD21, CD81, CD225 in mature B cells and regulates B lymphocyte activation with antigen stimulation. Mutations that will occur in the gene encoding the CD19 molecule affect CD19 protein expression and the picture of primary immunodeficiency (PIY). In this study, we aimed to evaluate the 3-month-old baby of our patient, who was followed up with a diagnosis of CD19 deficiency, in terms of the same gene mutation using the RFLP method. The patient with known CD19 mutation, the newborn baby of this patient and the patient’s mother were included in the study. First, primers covering the mutation region in the CD19 gene were designed for mutation analysis and the PCR-RFLP procedure was performed. The DNA fragments formed were imaged and genotyped in agarose gel electrophoresis. In terms of the frame shift mutation (c.973_973insA) of the CD19 gene detected in exon 6 of our patient, it was shown by the PCR-RFLP method that her baby and mother were carriers. It is concluded that the PCR-RFLP method is an inexpensive, fast and reliable method that can be used in the detection of known mutations.

PDF

___

1.Picard C, Bobby Gaspar H, Al-Herz W, et. al. International union of immunological societies:2017 Primary immunodeficiency diseases committee report on inborn errors of immunity. J Clin Immunol 2018;38(1):96-128.
2.Ballow M. Primary immunodeficiency disorders: antibody deficiency. J Allergy Clin Immunol 2002;109:581-91.
3.Wang K, Wei G, Liu D, et. al. CD19: A biomarker for B cell development, lymphoma diagnosis and therapy. Exp Hematol Oncol 2012;29(1):36.
4.Şekerel BE. Çocukluk Çağından Alerji Astım İmmünoloji. 1st Baskı, Ankara, Türkiye, 2015; p:21-42.
5.Van Zelm MC. Reisli I. Van der Burg M, et. al. An antibody-deficiency syndrome due to mutations in the CD19 gene. N Eng J Med 2006;354(18):1901-12.
6.Reisli İ, Artaç H, Pekcan S, ve ark. CD19 molekül eksikliği: Bir köy taraması. Tur Arch Ped 2009;44:127-30.
7.Dib C, Faure S, Fizames C, et. al. A comprehensive genetic map of the human genome based on 5,264 microsatellites. Nature 1996;380(6570):152-54.
8.Ota M, Fukushima H, Kulski JK, et. al. Single nucleotide polymorphism detection by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism. Nat Protocols 2007;2(11):2857-64.
9.Karaselek MA, Kapaklı H, Keleş S, et. al. Intrauterine detection of DCLRE1C (Artemis) mutation by restriction fragment length polymorphism. Pediatr Allergy Immunol 2019;30(6):668-71.