Engin ŞEKER, Mustafa SARIEYYÜPOĞLU, Burhan ÇETİNKAYA

Tatlı su midyesinden (Unio elongatulus eucrrus Bourguignat, 1860) izole edilen salmonella' ların polimeraz zincir reaksiyonu (PZR) ile identifikasyonu

Bu çalışmada, Elazığ Keban Baraj gölünün Koçkale ve Pertek yörelerinden elde edilen 627 adet canlı tatlı su midyesinde (Unio elongatulus eucirrus Bourguignat, 1860) Salmonella'ların varlığı araştırıldı. Midyelerin yumuşak dokularından hazırlanan homojenizatlar Rappaport Vasilliadis buyyonunda ön zenginleştirmeden geçirildikten sonra. Brilliant Green Phenol Red Laktoz agar ve Salmonella - Shigella selektif besiyerlerine ekimler yapıldı. Üreyen Salmonella şüpheli suşlara biyokimyasal testler uygulandığında, Koçkale yöresinden toplanan 397 midyenin 19'unda (% 4,8) Salmonella spp.'nin izolasyon ve identifikasyonu yapıldığı halde, Pertek yöresinden temin edilen 230 midyede bu etkene rastlanılmadı. Yine bu suşlardan ekstrakte edilen DNA'lar, Salmonella'ların 16S rRNA geninden türetilen bir çift cins spesifik primer kullanılarak Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PZR)'nda amplifikasyona tabi tutuldu. PZR ürünleri agarozjel elektroforezde değerlendirildiğinde, 19 şüpheli susun hepsinde Salmonella spesifik gen bölgesinin mevcut olduğu saptandı. Geniş bir uygulama alanına sahip PZR'nin bu çalışma ile su ürünlerinde de etken identifikasyonu amacıyla başarılı bir şekilde uygulanabileceği kanıtlandı. Ayrıca, baraj gölünün Koçkale yöresindeki tatlı su midyelerinin tüketilmesinin de insan sağlığı açısından tehlikeli olduğu görüldü.

İdentification of salmonella isolated from freshwater mussels (Unio elangatulus eucirrus Bourguignat, 1860 by polymerase chain reaction

In this study, 627 live freshwater mussels collected from the Koçkale and Pertek regions of Keban Dam Lake were examined for the presence of Salmonella spp. Homogenates prepared from the soft tissue of mussels, after pre-enrichment in Rappaport Vasilliadis, were inoculated onto Brilliant Green Phenol Red Lactose agar and Salmonella-Shigella selective media. Biochemical tests and DNA extraction were carried out on isolates suspected of containing Salmonella. From 19 (4.8%) out of 397 mussels collected in the Koçkale region, Salmonella spp. were isolated and identified, but the agent could not be detected in mussels obtained from the Pertek region. DNA extracted from these isolates was amplified by polymerase chain reaction (PCR) using a pair of genus-specific primers derived from the 16S rRNA gene of Salmonella. Analysis of PCR products on agarose gel electrophoresis showed that the Salmonella specific gene was present in all 19 isolates. In conclusion, it was demonstrated that PCR, which has a very wide application field, could also be used in aquaculture for the identification of microbiological agents. Moreover, in the light of the data obtained in this study, the consumption of uncooked freshwater mussels living in the Koçkale region of Keban Dam Lake may threaten public health.

PDF

___

1- Hickman-Brenner, F.W., Stubbs, A.D., Farmer, J.J.: Phage Typing of Salmonella enteritidis in the United States. J. Clin. Microbiol., 1991; 29; 2817-2823.
2- Pohl, P., Lintermans, H., Marin, M., Couturier, M.: Epidemiological Study of Salmonella enteritidis Strains of Animal Origin in Belgium. Epidemiol. Infect., 1991; 106: 11-16.
3- Bernoth, E.M.: Risiken Beim Umgang mit Fischen Durch Bewegliche Aeromonaden. Arztl. Lab., 1990; 36: 213-217.
4- Love, T.D., Minkler, B.H.: Studies of Salmonella Potential in Catfish Feeds. Com. Fish. Rev., 1972; 34: 5-7.
5- Saneyyüpoğlu, M.: Gökkuşağı Alabalıklarında (Oncorhynchus mykiss) Mide ve Barsak Bakteriyel Florasının Aerobik Yönden İncelenmesi. Doğa Bilim Dergisi., 1984; D1; 8: 281-287.
6- Taylor, J.: Salmonella in Wild Animals., Symp. Zool. Soc. London., 1968:24:51-73.
7- Şeker, E., Saneyyüpoğlu, M: Keban Baraj Gölünün Koçkale Bölgesinden Toplanan Tatlı Su Midyesinde (Unio elongatulus eucirrus Bourguignat,1860) Mide ve Bağırsakların Fekal KoJiformlar Yönünden İncelenmesi. F.Ü. Fen ve Müh. Bilimleri Dergisi, 1998;" 10: 45-53.
8- Martinez, E., Morinigo, M.A., Cornax, R., Egea, A.F., Borrego, J.: Relationship between Classical Indicators and Several Pathogenic Microorganisms Involved in Shellfish-Borne Diseases. J. Food. Protec, 1991; 54: 711-717.
9- Reda, W.W.: Studies on Fish as a Source of Salmonella Serotypes in Fish in Retail Trade in Kochi. Fish. Technol. Soc, 1993; 41:13-16.
10- Youssef, H., El-Timawy, A.K., Ahmed, S.: Role of Aerobic Intestinal Pathogens of Fresh-Water Fish in Transmission of Human Diseases. J. Food Prat. 1992; 55: 739-740.
11- İnal, T.: Besin Hijyeni. İkinci Baskı, Final Ofset A.Ş., istanbul, 1992, 783 s.
12- WHO, Salmonellosis Control. The Role of Animal and Product Hygiene. WHO Expert Committee Technical Report Series 774 World Health Organization, 1984, Geneva.
13- Barrow, P.A.: Salmonella Control, Past, Present and Future. Avian Pathol., 1993; 22:651-699.
14- Bocek, A.j., Brady, Y.J., Rogers', W.A.: Exposure of Silver carp, Hypophthalmichthys, to Salmonella typhimurium. Aquaculture, 1992; 103:9-16.
15- Guthrie, R.K.: Salmonella CRC Press Inc., London, 1992.
16- Ertaş, H.B., Çetinkaya, B., Şeker, E., Muz, A., Sarıeyyüpoğlu, M., Elazığ ve Çevresindeki Çeşitli Su Kaynaklarından Temin Edilen Balıklardan Salmonella izolasyonu ve PCR ile Teyit Edilmesi. F.Ü. Sağlık Bil. Dergisi, 1999; 13(2): 15-20
17- Meçgel, E.: Balık ve Midyelerde Salmonella, Vibrio ve Aeromonas Cinsi Bakteriler (Yüksek Lisans Tezi), istanbul Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü, 1992.
18- Morse, E.V., Greenwood, D.E., Meyers, E.P., Anderson, V.L., Duncan, M.A., Experimental Salmonella Infections in Carassius auratus (Goldfish). J. Environ. Sci. Health; 1978; 13: 325-335.
19- Sarıeyyüpoğlu, M.: Salmonella Potential in Aquarium Fish Feeds. Fırat Üniv. Dergisi; 1987; 2(2): 59-62.
20- Bullock, A.M.: Laboratory Methods. In Fish Pathology, Roberts, R., Second Edition. BailliereTindall, London, 1989; 374-407.
21- Çetinkaya, B.: Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PZR) Temel Prensipler. F. 0. Sağlık Bilimleri Dergisi., 1998; 12, 149-156.
22- Plumb, A.J., Bowser, R.P.: Microbial Fish Disease Laboratory Manual. Auburn, Alabama Agricultural Experiment Station, Auburn University, 95 p., 1983.
23- Saiki, R.K., Gelfand, D.H., Stoffel, S., Scharf, S.J., Higuchi, R.. Horn, G.T., Mullis, K.B., Erlich, H.A.: Primer-Directed Enzymatic Amplification of DNA with a Thermostable DNA Polymerase. Science, 1988; 239: 487-491.
24- Bailey, J.S.: Detection of Salmonella Cells within 24 to 26 Hours- in Poultry Samples with the Polymerase Chain Reaction BAX System. J. Food Prat., 1998; 61: 792-795.
25- Erlich, H.A., Gelfand, D., Sninsky, J.J.: Recent Advances in the Polymerase Chain Reaction. Science, 1991; 252: 1643-1651
26- Anonim: Keban Baraj Gölü Limnolojik Raporu. Bayındırlık ve iskan Bakanlığı Devlet Su işleri Genel Müdürlüğü. IX. Bölge Müdürlüğü Su Ürünleri Başmühendisliği. Elazığ, 1994.
27- Lassen, J.: Rapid Identification of Gram-Negative Rods Using a Three-Tube Method Combined with a Dichotomic Key. Acta Path Microbiol., 1975; 83: 525-533.
28- Arda, M.: Özel Mikrobiyoloji. A.Ü. Vet. Fak. Medisan Yayın Serisi No. 26, Medisan Yayınevi, Ankara, 1997.
29- Bilgehan, H.: Klinik Mikrobiyolojik Tanı. Barış Yayınları, Fakülteler Kitabevi, Şafak Matbaacılık, Ankara II. Baskı, 1995; 364-451.
30- Bekar, M.: Salmönella'ların Genel Karakterleri ve Tanı Yöntemleri Etlik Vet. Kont. Araşt. Enst, Ankara, 1997.
31- Lin, C.K., Tsen H.Y.: Use of two 16S DNA Targeted Oligonucleotides as PCR Primers for the Specific Detection of Salmonella in Foods. J. Appl. Bacteriol., 1996; 80 : 659-666.
32- Connel, J.J.: Control of Fish Quality. 2nd Ed., Fishing News Books Ltd. Farnham, Surrey. England, 1980.
33- Göğüs, A.K., Kolsarıcı, N.: Su Ürünleri Teknolojisi. Ankara Üniv. Ziraat Fak. Yayınları, Ankara, 1992; 1243: 261
34- Turick, C.E., Sextone, A.J., Bissonnete, G.K.: Freshwater Mussels as Monitors of Bacteriological Water Quality. Water- Air- Soil-Pollut, 1988:40:449-460.
35- Anonim: Su Ürünleri Kanunu ve Su Ürünleri Yönetmeliği. Tarım ve Köy işleri Bakanlığı, Koruma ve Kontrol Genel Müd., Ankara, 1995.