Akut bruselloz tanısında polimeraz Zincir Reaksiyonu yöntemininin kullanımı
Amaç: Bruselloz, pek çok ülkede olduğu gibi ülkemiz için de önemli bir halk sağlığı sorunu olan zoonozdur. Özgül olmayan şikayetler ve bulgularla seyreden hastalığın tanısında altın standart olan kültürde bakteriyi üretmek oldukça zor ve zaman alıcıdır. Rutinde daha sık kullanılan serolojik yöntemlerin çapraz reaksiyonlardan dolayı özgüllüğü düşüktür. Polimeraz zincir reaksiyonu PZR gibi moleküler yöntemler pek çok enfeksiyon hastalığı gibi brusellozun erken ve hızlı tanısında iyi bir alternatif yöntemdir. Bu çalışmada, bruselloz tanısında PZR yönteminin konvansiyonel yöntemlerle karşılaştırılması amaçlandı. Yöntemler: Çalışma grubu bruselloz ön tanılı 35 hasta ve 20 sağlıklı gönüllüden oluşturuldu. Hasta ve kontrol grubundan serolojik çalışma için serum, PZR için tam kan alınırken, hastalardan ateşli oldukları dönemde kan kültürleri alındı. Tam kan örneklerinden elde edilen lökosit pelletlerinden DNA izolasyonu yapıldı ve brusella DNA’ sı in house PZR yöntemiyle tespit edildi. Bulgular: Hastaların Standart tüp aglütinasyon SAT değeri 1 olguda 1/80 iken, diğerlerinde ≥1/160 idi. Bunların 16’sında kan kültürü pozitif bulundu. Kontrollerin SAT değerleri negatif idi. PZR yöntemiyle yapılan çalışmada hastaların %97’sinde pozitiflik saptanırken kontrollerin hepsi negatif bulundu. Sonuç: Kullanılan PZR yönteminin erken ve hızlı tanıda yüksek duyarlılıkta olduğu, bu nedenle bruselloz hızlı ve doğru tanısı için kullanılmasının uygun olacağı sonucuna varıldı.
Diagnosis of acute brucellosis by polymerase chain reaction technique
Objective: Brucellosis is a zoonotic disease which is a public health problem in our country like many parts of the world. The illness has nonspecific symptoms and physical signs. Bacterial culture is gold standard in the diagnosis of brucellosis but it is difficult and time consuming, so serologic techniques are used routinely. But serologic techniques have low specificity because of cross reactions. Molecular methods like polymerase chain reaction PCR are good alternatives in the early and rapid diagnosis of brucellosis, as it is in other infectious diseases. The aim of this study was to compare PCR method with conventional methods in the diagnosis of brucellosis. Methods: The study included 35 patients and 20 healthy volunteers. Sera for serology and whole blood samples for PCR were collected from each subject in both groups. DNA was extracted from peripheral mononuclear cells obtained from the blood samples and an in house PCR assay was used to detect brucella DNA. Results: Standart tube agglutination STA titers of most patients were ≥1/160, except one patient which was 1/80. Blood cultures were positive for 16 patients. The STA titers of all controls were negative. PCR was positive for 97% of the patients and all of the volunteers were negative. Conclusion: It is concluded that the tested PCR assay has high sensitivity in the diagnosis of brucellosis and it may be used in rapid and accurate diagnosis of brucellosis.
___
- 1. Young EJ, Mandell GL, Bennett JE, Dolin R, eds.
Principles and Practice of Infectious Diseases.
5th ed. Philadelphia: Churchill Livingstone, 2005:
2669-73.
- 2. Sözen TH. Bruselloz. İnfeksiyon Hastalıkları ve
Mikrobiyolojisi. Ed: Willke Topçu A, Söyletir G,
Doğanay M. Nobel Tıp Kitabevleri, 2002; 636-42.
- 3. Mehmet Uluğ, Nuray Can-Uluğ. Brusellozlu 78
Olgunun Değerlendirilmesi. Klimik Dergisi, 2010;
23(3): 89-94.
- 4. Kılıç S, Babür C. Biyolojik silah olarak bakteriler
“Kategori B ajanlar”. Türk Hij Den Biyol Derg 2006;
63: 47–66.
- 5. Al Dahouk S, Tomaso H, Nöckler K, Neubauer H,
Frangoulidis D. Laboratory-based diagnosis of
brucellosis—a review of the literature. Part I:
Techniques for direct detection and identification.
Clin Lab, 2003; 49: 487–505.
- 6. Kılıç S. Mikrobiyolojik Tanı. Türkiye Klinikleri J Inf
Dis-Special Topics, 2012; 5 (1): 46-66.
- 7. Kılıç S, Çelebi B, Bayram Y, Çitil B. Francisella
tularensis antikorları ile çapraz reaksiyonlarının
araştırılması. Turk Hij Den Biyol Derg, 2013; 70(2):
65–70.
- 8. Kocabeyoğlu Ö. Brucella abortus, Brucella
melitensis, Yersinia enterocolitica. Serotip 0:3
ve 0:9 Arasındaki Antijenik İlişkinin Araştırılması.
Mikrobiyoloji Bülteni, 1990; 24(3): 218-25.
- 9. Aktas. O. Brusellozda Mikrobiyolojik Tanı. ANKEM
Derg, 2003; 17: 336-39.
- 10. Al Dahouk S, Tamaso H, Nockler K, Neubauer
H, Frangoulidis D. Laboratory-based diagnosis
of brucellosis-A Review of literature. Part 2:
Serological Tests for brucellosis. Clin Lab, 2003;
49: 577-89.
- 11. Navarro E, Casao MA, Solera J. 2004. Diagnosis
of human brucellosis using PCR. Expert Rev Mol
Diagn, 4(1): 115-23.
- 12. Navarro E, Segura JC, Castaño MJ, Solera J. Use of
Real-Time Quantitative Polymerase Chain Reaction
to Monitor the Evolution of Brucella melitensis
DNA Load During Therapy and Post-Therapy FollowUp in Patients with Brucellosis. Clin Infect Dis,
2006; 42 (9): 1266-73.
- 13. Erdenliğ S. Türkiye’de Brucella kökenleri. Klimik
Derg, 2003; 16: 214-6.
- 14. Bilgehan H. Klinik Mikrobiyolojik Tanı. Barış
Yayınları Fakülteler Kitapevi. 4. Baskı. İzmir, 2000;
475-80.
- 15. Fındık D. Bruselloz tanısında sorunlar. Klimik
Kongre kitabı. 2005: 104-7.
- 16. Bilgehan H. Klinik Mikrobiyolojik Tanı. Barıs Yayınları
Fakulteler Kitapevi. 4. Baskı. İzmir, 2000; 227-8.
- 17. Badur S. Brusellozda Serolojik Tanı ve
Seroepidemiyoloji. Klimik Derg, 1990; 3:
1-1720.
- 18. Baily GG, Kranhn JB, Drasar BS, Stoker NG.
Detection of melitensis and abortus by DNA
amplification. J Trop Med Hyg, 1992; 95:
271–7.
- 19. Ariza J, Pellicer T, Pallares R, Foz A, Gudiol F.
Specific antibody profile in human brucellosis. Clin
Infect Dis, 1992; 14(1): 131-40.
- 20. Yüce A, Alp-Çavuş S. Türkiye’de bruselloz: Genel
bakış. Klimik Derg, 2006; 19(3): 87-9.
- 21. Apan TZ, Kaygusuz S, Kılıç D, Yıldırım A, Aksoy A,
Ayaşlıoğlu E. Kırıkkale Üniversitesi Tıp Fakültesi
Polikliniklerine Başvuran Kişilerde Bruselloz
Seroprevalansı. İnfeksiyon Derg, 2004; 18(2):
175-8.
- 22. Yu WL, Nielsen K. Review of detection of Brucella
spp. by polymerase chain reaction. Croat Med J.
2010; 51(4): 306-13.
- 23. Fekete A, Bantle JA, Halling SM, Sanborn MR.
Preliminary development of a diagnostic test for
using polymerase chain reaction. J Appl Bacteriol,
1990; 69: 216–27.
- 24. Herman L, De Ridder H. Identification of Brucella
spp. By using the polymerase chain reaction. Appl
Environ Microbiol, 1992; 6: 2099-101.
- 25. Romero C, Gamazo C, Pardo M, Lopez-Goni I.
Specific detection of DNA by PCR. J Clin Microbiol,
1995; 33: 615–7.
- 26. Navarro E, Escribano J, Fernandez J, Solera J.
Comparison of three different PCR methods
for detection of spp. in human blood samples.
FEMS Immunol Med Microbiol, 2002; 34(2):
147-51.
- 27. Nimri LF. Diagnosis of recent and relapsed cases
of human brucellosis by PCR assay. BMC Infect Dis,
2003; 3: 5.
- 28. Queipo-Ortuno MI, Morata P, Ocon P, Manchado
P, Colmenero JD. Rapid diagnosis of human
brucellosis by peripheral-blood PCR assay. J Clin
Microbiol, 1997; 35: 2927-30.
- 29. Matar GM, Khneisser IA, Abdelnoor AM. Rapid
laboratory confirmation of human brucellosis
by PCR analysis of a target sequence on the
31-kilodalton antigen DNA. J Clin Microbiol, 1996;
34: 477-8.
- 30. Casanas MC, Queipo-Ortuno MI, Rodriguez-Torres
A, Orduna A, Colmenero JD, Morata P. Specificity
of a polymerase chain reaction assay of a target
sequence on the 31-kilodalton Brucella antigen
DNA used to diagnose human brucellosis. Eur J Clin
Microbiol Infect Dis, 2001; 20: 127-31.
- 31. Mitka S, Anetakis C, Souliou E, Diza E, Kansouzidou
A. Evaluation of different PCR assays for early
detection of acute and relapsing brucellosis in
humans in comparison with conventional methods
J Clin Microbiol, 2007; 45(4): 1211-8.
- 32. Al-Nakkas A, Mustafa AS, Wright SG. Largescale evaluation of a single-tube nested PCR
for the laboratory diagnosis of human brucellosis
in Kuwait. J Med Microbiol, 2005; 54(8):
727-30.
- 33. Morata P, Queipo-Ortuno MI, Colmenero JD.
Strategy for optimizing DNA amplification in a
peripheral blood PCR assay used for diagnosis of
human brucellosis. J Clin Microbiol, 1998; 36:
2243–6.
- 34. Navarro E, Escribano, J, Solera, J. PCR assay for
diagnosis of human brucellosis. J Clin Microbiol,
1999; 37(5): 1654-5.
- 35. Çırak MY, Hızel K. Bruselozisin tanısında iki
farklı gen bölgesini hedefleyen polimeraz zincir
reaksiyonu yöntemlerinin değeri. Mikrobiyol Bul,
2002; 36: 271-6.
- 36. Vrioni G, Gartzonika C, Kostoula A, Boboyianni C,
Papadopoulou C, Levidiotou S. Application of a
polymerase chain reaction enzyme immunoassay
in peripheral whole blood and serum specimens
for diagnosis of acute human brucellosis. Eur J Clin
Microbiol Infect Dis, 2004; 23(3): 194-9.
- 37. Debeaumont C, Falconnet PA, Maurin M Real-time
PCR for detection of Brucella spp. DNA in human
serum samples. Eur J Clin Microbiol Infect Dis,
2005; 24(12): 842-5.
- 38. Queipo-Ortuno MI, Colmenero JD, Reguera JM,
Garcia-Ordonez MA, Pachon ME, Gonzalez M,
Morata P. Rapid diagnosis of human brucellosis
by SYBR Green I-based real-time PCR assay and
meltingcurve analysis in serum samples. Clin
Microbiol Infect, 2005; 11(9): 713–8.
- 39. Queipo-Ortuno MI, Colmenero JD, Baeza G, Morata
P. Comparison between LightCycler real-time
polymerase chain reaction (PCR) assay with serum
and PCR-enzyme-linked immunosorbent assay with
wholeblood samples for the diagnosis of human
brucellosis. Clin Infect Dis, 2005; 40: 260-4.
- 40. Morata P, Queipo-Ortuño MI, Reguera JM,
García-Ordoñez MA, Pichardo C, Colmenero JD.
Posttreatment Follow-Up of Brucellosis by PCR
Assay. J Clin Microbiol, 1999; 37(12): 4163–6.