Gözde R. ÖZALP, Elif EVKE, Elçin ÖZOCAK, - BATMAZ, Yasemin ÖZEN, - POLAT, E. Sinem ÖZDEMİR, - SALCI, Zeynep KAHVECİ

In Vitro Kültürde Zenginleştirilen Domuz Folikül ve Amniyon Hücrelerinden RNA Ekstraksiyonu

Amniyotik hücreler fetustan köken alan ve birçok farklı doku tipine dönüşebilen hücrelerdir. Bu durum hücrelerin birçok medikal uygulamada kullanılmasına olanak sağlar. Amniyotik ve foliküler sıvılar, prenatal tanıda çok etkili bir metod olan amniyosentez ile toplanmaya çalışılmıştır. Uygulamadan 48 saat sonra domuzlarda abortus görüldüğü ve toplanan hücre sayısının yeterli olmamasından dolayı, örneklerin steril şartlar altında operasyonla toplanmasına karar verilmiştir. Alınan hücreler yeterli sayı ve mitotik aktiviteye ulaşıncaya kadar hücre kültüründe geliştirilmiştir. Takibinde Trizol ile muamele edilerek hücrelerden RNA izolasyonu yapılmıştır. Amniyotik ve foliküler hücrelerin iyi kalitede üremelerine rağmen RNA izolasyonlarından alınan sonuçlar çok tatmin edici olmamıştır. RNA bütünlüğü agaroz jel elektroforezi ile kontrol edilmiştir. Elektroforez sonuçlarına göre foliküler hücrelerden elde edilen örneklere ait 28s, 18s ve 5s rRNA bantları gözlenirken, amniyotik hücre kültürlerine ait örneklerde hiç bant gözlenmemiştir. Bu sonuçlar domuza ait amniyotik ve foliküler hücrelerin in vitro ortamda üretilebildiğini göstermiştir. Ancak amniyon hücrelerine ait başarısız RNA izolasyonları açıklanamamaktadır. Amniyotik hücreler için hazırlanacak kültüre bazı zenginleştirmeler yapılabileceği yada izolasyon için daha farklı metotların kullanılabileceğini önerilebilir

Anahtar Kelimeler:

Amniyotik hücre, foliküler hücre, domuz

In Vitro Kültürde Zenginleştirilen Domuz Folikül ve Amniyon Hücrelerinden RNA Ekstraksiyonu

Keywords:

-,

PDF

___

Abdi, R., Fiorina,.P., Adra, C.N., Atkinson, M., Sayegh, M.H. 2008. Immuno-modulation by mesenchymal stem cells: a potential therapeutic strategy for type 1 diabetes. Diabetes 57: 1759- 1767
Antonucci, I., Iezzi, I., Morizio, E., Mastrangelo, F., Pantalone, A., Mattioli-Belmonte, M., Gi- gante, A., Salini, V., Calabrese, G., Tete, S., Palka, G., Stuppia L.2009. Isolation of osteogenic progenitors from human amniotic fluid using a single step culture protocol. BMC Biotechnol.9: 9
Armstrong, J., Cohen, A.W., Bombard, A.T.2002. Comparison of amniocentesis – related loss rates between obstetrician-gynecologists and perinatologists. Obstet Gynecol. 99: 65.
Beksaç, M.S. Fetal Tıp; Prenetal Tanı.Ankara, Medical Network, 1996: 29 -38.
Canazi, M., Atala, A., De Coppi, P. 2009. Stem cells derived from amniotic fluid: new potentials in regenerative medicine. Reprod Biomed Online. 18 Suppl 1: 17-27
Caplan, A.I.2009. Why are MSCs therapeutic? New data: new insight. J Pathol. 217: 318-324
Centeno, C.J., Busse, D., Kisiday, J., Keohan, C., Freeman, M., Karli, D. 2008. Increased knee car- tilage volume in degenerative joint disease using percutaneously implanted, autologous mesen- chymal stem cells. Pain Physician. 11: 343-353
De Coppi, P., Bartsch, G. Jr. Siddiqui, M.M., Xu, T., Santos, C.C., Perin, L., Mostoslavsky, G., Serre, A.C., Snyder, E.Y., Yoo, J.J., Furth, M.E., Soker,.S, Atala, A.2007.Isolation of amniotic stem cell lines with potential for therapy. Nature Biotechnology. 25:100-106
Drugan, A., Johnson, M.P., Evans, M.I..1992. Amniocentesis in: Evans MI (Ed) Reproductive Risks and Prenatal Diagnosis. Apple- ton& Lange Connecticut. 191-200
Eddleman, K., Berkowitz. R., Kharbutli, Y.2003. Pregnancy loss rates after midtrimester amnio- centesis: The FASTER trial. Am J Obstet Gyne- col. 189: 111.
Fuchs, J.R., Kaviani, A., Oh, J.T., LaVan, D., Udagawa, T., Jennings, R.W., Wilson, J.M., Fauza, D.O.2004. Diaphragmatic reconstruction with autologous tendon engineered from mesen- chymal amniocytes. J Pediatr Surg. 39: 834-838
http://www.freepatentsonline.com/y2007/010469 1.html
Harris, M.C., Mennuti, M.T., Kline, J.A., Polin, R.A.1998. Amniotic fluid fibronectin concentra- tions with advancing gestational age. Obstet Gy- necol. 72:593-595.
Hauser, P.V., De Fazio, R., Bruno, S., Sdei, S., Grange, C., Bussolati, B., Benedetto, C., Ca- mussi, G. 2010. Stem cells derived from human amniotic fluid contribute to acute kidney injury recovery. Am J Pathol. 177:2011-21
Hoehnn, H., Bryant, E.M., Karp, L.E., Martin, G.M. 1974. Cultivated cells from diagnostic am- niocentesis in second trimester pregnancies. I. Clonal morphology and growth potential. Pediatr Res. 8: 746-754
Jıngushi, S., Joyce, M.E., Bolander, M.E. 1993. Basic fibroblast factors in rat fracture repair. Or- thop Trans. 17: 713-714.
Kaviani, A., Perry, T.E., Dzakovic, A., Jennings, R.W., Ziegler, M.M., Fauza, D.O. 2001. The am- niotic fluid as a source of cells for fetal tissue en- gineering. J Pediatr Surg. 36:1162-1165
Kunisaki, S.M., Freedman, D.A., Fauza, DO. 2006. Fetal tracheal reconstruction with cartilagi- nous grafts engineered from mesenchymal am- niocytes. J Pediatr Surg. 41: 675-682
Le Blanc, K., Frassoni, F., Ball, L., Locatelli, F., Roelofs, H., Lewis, I., Lanino, E., Sundberg, B., Bernardo, M.E., Remberger, M., Dini, G., Egeler, R.M., Bacigalupo, A., Fibbe, W., Ringden, O. 2008. Mesenchymal stem cells for treatment of steroid-resistant, severe, acute graft-versus-host disease: a phase II study. Lancet 371: 1579-1586
Merimee, T.J., Grant, M., Tyson, J.E. 1984. Insu- lin-like growth factors in amniotic fluid. J Clin Endocrinol Metab. 752: 55.
Özalp, G.R., Şimşek, G., Akçağlar, S., Shenavai, S. 2010. Trizol RNA Ekstraksiyon Metodu: İnek Plasentomu için Oldukça Etkili Metod Değer- lendirmesi. Uludag Univ. J.Fac. Vet.Med. 1: 1-6
Özgenel, G.Y., Filiz, G., Özcan, M. 2004. Effects of human amniotic fluid on cartilage regeneration from free perichondrial grafts in rabbits. Br J Plast Surg. 57: 427-428.
Parolini, O., Soncini, M., Evangelista, M., Schmidt, D.2009. Amniotic membrane and am- niotic fluid-derived cells: potential tools for re- generative medicine? Regen Med. 4: 275-291
Perin, L., Sedrakyan, S., Da Sacco, S., De Filippo, R. 2008. Characterization of human am- niotic fluid stem cells and their pluripotential ca- pability. Methods Cell Biol. 86: 85-99
Perin, L., Giuliani, S., Jin, D., Sedrakyan, S., Carraro, G., Habibian, R., Warburton, D., Atala, A., De Filippo, R.E. 2007. Renal differentiation of amniotic fluid stem cells. Cell Prolif. 40: 936- 948
Prusa, A.R., Marton, E., Rosner, M., Bettelheim, D., Lubec, G., Pollack, A., Bernaschek, G., Hengstschlager, M. 2004. Neurogenic cells in human amniotic fluid. Am J Obstet Gynecol. 191: 309-314
Schmidt, D., Achermann, J., Odermatt, B., Genoni, M., Zund, G., Hoerstrup, S.P. 2008. Cryopreserved amniotic fluid-derived cells: a lifelong autologous fetal stem cell source for heart valve tissue engineering. J Heart Valve Dis. 17: 446-455
Sessarego, N., Parodi, A., Podesta, M., Ben- venuto, F., Mogni, M., Raviolo, V., Lituania, M., Kunkl, A., Ferlazzo, G., Bricarelli, F.D., Uccelli, A., Frassoni, F.2008. Multipotent mesenchymal stromal cells from amniotic fluid: solid perspec- tives for clinical application. Haematologica. 93: 339-346
Steigman, S. A., Ahmed, A., Shanti, R.M., Tuan, RS., Valim, C., Fauza, D.O. 2009. Sternal repair with bone grafts engineered from amniotic mes- enchymal stem cells. Journal of Pediatric Sur- gery. 44: 1120–1126
Siegel, N., Valli, A., Fuchs, C., Rosner, M., Hengstschlager, M. 2009. Induction of mesen- chymal/epithelial marker expression in human amniotic fluid stem cells. Reprod Biomed Online. 19: 838-846
Siegel, N., Rosner, M., Hanneder, M., Freilinger, A., Hengstschlager, M. 2008. Human amniotic fluid stem cells: a new perspective. Amino Acids. 35: 291-293.
Steele, W.W., Breg, W.R.1996. Chromosome analysis of human amniotic fluid cells. Lancet 1: 383-385
Steigman, S.A., Armant, M., Bayer-Zwirello, L., Kao, G.S., Silberstein, L., Ritz, J., Fauza, D.O. 2008. Preclinical regulatory validation of a 3- stage amniotic mesenchymal stem cell manufac- turing protocol. J Pediatr Surg. 43:1164-1169
Steigman, S.A., Ahmed, A., Shanti, R.M., Tuan, R.S., Valim, C., Fauza, D.O. 2009. Sternal repair with bone grafts engineered from amniotic mes- enchymal stem cells. J Pediatr Surg. 44: 1120- 1126
Tirelioğlu, O., Bilgen, M.S., Atıcı, T., Yalçınkaya, U., Bilgen, Ö.F. 2007. Tavşanda De- neysel Osteoartrit Modelinde İnsan Amniotik Sı- vısının Eklem İçi Uygulamasının Kıkırdak Doku ve Sinovya Üzerindeki Etkileri. Uludağ Üniver- sitesi Tıp Fakültesi Dergisi 33:121-125
Walther, G., Gekas, J., Bertrand, O.F. 2009. Amniotic stem cells for cellular cardiomyoplasty: promises and premises. Catheter Cardiovasc In- terv. 73: 917-924
Zhang, P., Baxter, J., Vinod, K., Tulenko, T.N., Di Muzio, P.J. 2009. Endothelial differentiation of amniotic fluid-derived stem cells; synergism of biochemical and shear force stimuli. Stem Cells Dev. 18: 1299-1308