Kedi ve Köpek Dokularının Farklı Fiksatiflerle Tespiti ve Histolojik Görünümlerinin Karşılaştırılması

Tespit işlemi, hücre ve doku komponentlerinin ölüm sonrasında morfolojik özelliklerinin canlıdaki durumuna en yakın şekilde sabitleyip, histolojik olarak incelenmesine olanak tanır. Tespit işleminde kullanılan kimyasal ajanlara fik-satif denir. Yirminci yüzyıldan günümüze kadar rutin doku tespit işleminde formaldehit çözeltisi kullanılmaktadır. Her fiksatif doku tespit işlemi süresince doku histomorfolojisinin incelenmesi adına avantaj ve dezavantajlara sahiptir. Bu nedenle tespit işlemi için amaca yönelik doğru fiksatif ile çalışılması gerekir. Bu çalışmada hedef, 3 farklı fiksatif ile hazırlanan 4 çözeltinin, diğer faktörler optimum seviyede tutularak, doku tespit işlemi sürecinde nasıl etkilere sahip olduklarını belirlemek ve tespit özelliklerine göre en ideal kullanım amaçlarını ortaya çıkarmaktı. Bu amaçla, çalışmada doku tespit işlemi sırasında fiksatiflerin dezavantajlarından etkilenen ve hücre morfolojisinin incelenmesinde zorluklarla karşılaşılan dalak ve böbrek dokuları üzerinde çalışıldı. Yaklaşık 0.5 cm kalınlığındaki doku örnekleri hazırlanan %3.7`lik, %10`luk formaldehit ve Hollande çözeltilerinde 16 saat, Carnoy çözeltisinde ise 4 saat süre ile tespit edildi. Ru-tin doku takip işlemlerinden geçirildikten sonra alınan doku kesitleri H&E ile boyandı. Bu dokuların histomorfolojik ince-lemeleri yapıldığında hücre sitoplazma boyanması için en uygun fiksatifin %3.7`lik formaldehit çözeltisi olduğu, hücre çekirdek ve çekirdekçiklerinin morfolojisini ortaya koymada ise Carnoy ve Hollande çözeltilerin kullanımlarının ideal olduğu, ancak Carnoy çözeltisinin eritrositlerde ileri düzeyde lizise yol açtığı gözlendi. Sonuç olarak, doku tespit işle-minde %3.7`lik formaldehit çözeltisinin kullanımı ideal bulunurken, Carnoy ve Hollande çözeltilerinin ise hücre çekirdek-lerindeki histomorfolojik değişikliklerin detaylı incelenmesini gerektiren hastalıklarda etkili bir kullanım oluşturacakları ön görüldü.

Fixation and Comparative Histologic Evaluation of Cat and Dog Tissues using Different Fixatives

Fixation is a procedure that allows histological evaluation of cells and tissue components by fixing them to their closest morphological features in life-like state after death. Formaldehyde solution has been in use since the 20thcentury.During the tissue fixation, each fixatives represent their own advantages and disadvantages on the examina-tion of histomorphological properties of the tissues. So that, the fixation has to be performed with the appropriate fixa-tive depending on the research aim. The aim of this study was to determine the effects of four solutions, prepared by 3 different fixatives, on the tissue fixation process by keeping the other factors at an optimum level and to determine the most ideal use according to the fixation properties.For this purpose, the spleen and kidney tissues were studied, since they are generally affected by the disadvantages of fixatives during the tissue fixation process and lead to difficulties in examining cell morphology. Tissue samples of 0.5 cm thickness were fixed in the 3.7%, 10% formaldehyde and Hol-lande solutions for 16 hours and Carnoy solution for 4 hours. Thereafter, tissue samples were routinely proceeded, and sections were stained by H&E. The histomorphological examinations of these tissues revealed that the most suitable fixative for cytoplasmic staining was 3.7% formaldehyde solution, while the use of Carnoy and Hollande solutions was ideal in revealing the morphology of the nucleus and nucleolus. However the Carnoy solution caused high lysis in erythrocytes. As a result, it was concluded that the 3.7% formaldehyde solution could be ideally used in tissue fixation process, whereas Carnoy and Hollande solutions were seen to be effective in diseases that require detailed examina-tion of histomorphological changes in nucleus and nucleolus.

___

  • Ahmed HG, Mohammed AI, Hussein MOM. A comparison study of histochemical staining of various tissues after Carnoy’s and formalin fixation. Sud J Med Sc 2010; 5(4): 277-83.
  • Baker FJ, Silverton RE. Introduction to Medical Laboratory Technology. Fifth Edition. London: Butterworth & Co Ltd. 1976; p. 312
  • Bancroft JD, Gamble M. Theory and Practice of Histological Techniques. Sixth Edition. Philadelphia, PA: Churchill Livingstone/Elsevier, 2008; p. 53- 75.
  • Benerini Gatta L, Cadei M, Balzarini P, Castriciano S, Paroni R, Verzeletti A, Cortellini V, De Ferrari F, Grigolato P. Application of alternative fixatives to formalin in diagnostic pathology. Eur J Histochem 2012; 56(2): e12.
  • Coleman WB, Tsongalis GJ. Molecular Diagnostics: For the Clinical Laboratorian. Second Edition. New Jersey: Humana Press, Clifton, 2006; p. 204.
  • Crawford NC, Barer R. The action of formaldehyde on living cells as studied by phase-contrast microscopy. Q J Microsc Sci 1951; 3(20): 403-452.
  • Doğan, Ö. Histopatolojik tanı sürecinde standardizasyon. APJ 2005; 2: 8-28.
  • Drury RAB, Wallington EA. Carleton Histological Techniques. Fifth Edition. London: Oxford University Press, 1980; p. 36-44.
  • Eltoum I, Fredenburgh J, Myers RB, Grizzle WE. Introduction to the theory and practice of fixation of tissues. J Histotechnol 2001; 24(3): 173-90.
  • Fox CH, Johnson FB, Whiting J, Roller PP. Formaldehyde fixation. J Histochem Cytochem 1985; 33 (8): 845-53.
  • Freeman LEB, Blair A, Lubin JH, Stewart PA, Hayes RB, Hoover RN, Hauptmann M. Mortality from lymphohematopoietic malignancies among workers in formaldehyde industries: The national cancer institute cohort. J Natl Cancer Inst 2009; 101 (10): 751-61.
  • Gillespie JW, Best CJ, Bichsel VE, Cole KA, Greenhut SF, Hewitt SM, Ahram M, Gathright YB, Merino MJ, Strausberg RL, Epstein JI, Hamilton SR, Gannot G, Baibakova GV, Calvert VS, Flaig MJ, Chuaqui RF, Herring JC, Pfeifer J, Petricoin EF, Linehan WM, Duray PH, Bova GS, Emmert-Buck MR. Evaluation of non-formalin tissue fixation for molecular profiling studies. Am J Pathol 2002; 160(2):449-57.
  • Grizzle WE. The use of fixatives in diagnostic pathology. J Histotechnol 2001; 24(3): 151-2.
  • Grizzle WE. Models of fixation and tissue processing. Biotech Histochem 2009; 84(5): 185-93.
  • Kahyaoğlu F, Gökçimen A. Light microscopic determination of tissue. East J Med 2017; 22(3): 120-4.
  • Luz DABP, Ribeiro U Jr, Chassot C, Collet E, De Salles Collet e Silva F, Cecconello I, Corbett CE. Carnoy’s solution enchances lymph node detection: An anatomical dissection study in cadavers. Histopathology 2008; 53(6): 740-2.
  • Pereira MA, Dias AR, Faraj SF, Cirqueira Cdos S, Tomitao MT, Nahas SC, Ribeiro U Jr, de Mello ES. Carnoy's solution is an adequate tissue fixative for routine surgical pathology, preserving cell morphology and molecular integrity. Histopathology 2015; 66(3): 388-97.
  • Resch A, Langner C. Lymph node staging in colorectal cancer: Old controversies and recent advances. World J Gastroenterol 2013; 19(46): 8515-26.
  • Singhal P, Singh NN, Sreedhar G, Banerjee S, Batra M, Garg A. Evaluation of histomorphometric changes in tissue architecture in relation to alteration in fixation protocol - an invitro study. J Clin Diagn Res 2016; 10(8): 28-32.
  • Warmington AR, Wilkinson JM, Riley CB. Evaluation of ethanol-based fixatives as a substitute for formalin in diagnostic clinical laboratories. J Histotechnol 2000; 23(4): 299-308.
Erciyes Üniversitesi Veteriner Fakültesi Dergisi-Cover
  • ISSN: 1304-7280
  • Yayın Aralığı: Yılda 3 Sayı
  • Başlangıç: 2004
  • Yayıncı: Erciyes Üniv. Veteriner Fak.
Sayıdaki Diğer Makaleler

Jersey Irkı İneklerde Bazı Çevre Faktörleri ve İklim Koşullarının Döl ve Süt Verimi Özellikleri Üzerine Etkisi

Haşim Umut KOÇ, Mustafa UĞURLU

Kırıkkale Üniversitesi Veteriner Fakültesi Öğrencilerinin Fizyoloji Eğitimi Hakkındaki Düşüncelerinin Belirlenmesi

Ruhi KABAKÇI, Ayşe Arzu YIĞIT

Yonca Kuru Otunun İn Vitro Ruminal Gaz Üretimi, Metan Salınımı, Organik Asit ve Protozoa Sayısı Üzerine Defne Uçucu Yağının (LaurusnobilisL.) Etkisi

Süleyman Ercüment ÖNEL, Taylan AKSU, Kanber KARA, Devrim SARIPINAR AKSU

Kedi ve Köpek Dokularının Farklı Fiksatiflerle Tespiti ve Histolojik Görünümlerinin Karşılaştırılması

Funda YILDIRIM, Hazal ÖZTÜRK GÜRGEN

Nevşehir İlindeki Kesimhanelerden İzole Edilen Staphylococcus aureus İzolatlarının Moleküler Tiplendirilmesi ve Vankomisin Dirençliliğinin İncelenmesi

Ömer Tolga YILMAZ, Harun HIZLISOY

Nevşehir İli Süt Sığırcılığı İşletmelerinin Yapısı ve Hayvan Besleme Uygulamaları Yönünden Değerlendirilmesi

Yunus SEZER, Aytaç AKÇAY, Erol BAYTOK

İzmir İlinde Bulunan Hastalıktan Ari Sütçü Sığır İşletmelerinin Yapısal Özellikleri*

Osman DOĞAN, Berrin KOCAOĞLU GÜÇLÜ

Kadmiyum Uygulanan Farelerde Oluşturulan Oksidatif Strese Karşı Resveratrolün Koruyucu Etkisinin Araştırılması*

Canan IŞIK BİRCAN, Oğuz MERHAN

Broylerlerde Betain İlavesinin Performans, Karkas Verimi ve Bazı Kan Parametreleri Üzerine Etkisi

Tarkan ŞAHİN, Mükremin ÖLMEZ, Osman Çağrı ÖZEL

Deneysel Etilen Glikol Zehirlenmesi Oluşturulan Ratlarda Myokardiyal Etkilerin Araştırılması*,**

Burak DOĞAN, Vehbi GÜNEŞ