Glukoz-6-fosfat dehidrogenaz enzim eksikliği saptanan bir ailenin eritrosit zar yapısı ile antioksidan sistemi
Glukoz-6-fosfat dehidrogenaz (G6PD) enzim eksikliğinde hemolizin oluşmasının eritrositteki enzim aktivitesine ve oksidatif strese bağlı olabileceği düşünülerek eritrosit membran yapısı ve antioksidan sistem birlikte çalışılmıştır. Glukoz-6-fosfat dehidrogenaz enzimi kısmi eksik olan bir ailenin bireylerinin G6PD enzimi DE-52 selüloz pH 7.0 kolon kromatografisi ile kısmi olarak saflaştırılarak kinetik özellikleri çalışılmış, Dodge metoduna göre eritrosit zar proteinleri incelenmiş, süperoksit dismutaz (SOD) ve malondialdehit (MDA) tayini için Fridovich ve Ohkawa metodları kullanılmıştır. Kısmi saflaştırıtmış enzimin kinetik özellikleri ailenin üç bireyinde çalışıldığında KmG6PD değeri her üç bireyde de yüksek bulunurken (74µM, 156µM ve 147µM), KmNADP değeri baba ve çocukta yüksek (9µM, 8µM), annede ise normal bulunmuştur. NAD ve dNADP kullanımı her üç bireyde yüksek, galaktoz kullanımı ise çocukta düşük bulunmuştur. Optimum pH çalışmasında baba ve çocuğun bifazik, annenin ise monofazik özellik gösterdiği gözlenmiştir. Ailenin üç ferdinde band 3 protein eksikliği saptanmıştır. SOD verileri ailenin tüm üyelerinde normal bulunurken plazma MDA düzeyi band 3 eksikliği gözlenen olgularda yüksek bulunmuştur.
Erythrocyte membrane structure and antioxidant system of a family with G6PD enzyme deficiency
In the G6PD deficiency syndromes the cause of hemolysis is thought to be due to low enzyme activity and oxidative stress in the erythrocytes. To investigate the possible contributions the erythrocyte membrane proteins, antioxidant system and the G6PD enzyme activities of a family, known to be moderately deficient, were analyzed. The enzymes were purified from blood samples by utilizing DE-52 cellulose pH 7.0 column chromatography. Biochemical properties of G6PD were studied in these partially purified enzymes. The erythrocyte membrane proteins were detected according to the Dodge method. The Fridovich and Ohkawa methods were used for the detection of superoxide dismutase (SOD) and malondialdehid (MDA). When the biochemical properties of partially purified enzyme were studied, three members of the family found to have high Km (74µM, 156µM and 147µM) for G6PD and also father and his daughter have high Km NADP (9µM, and 8µM) values. Utilization of NAD and dNADP analogs was high in three members of the family, utilization of galactose was high in mother and father but low in daughter. At the optimum pH studies, although father and daughter had biphasic pH optimum curve but mother had monophasic pH curves. Abnormality in membrane proteins were detected as band 3 deficiency in three members of family. While the data of SOD were found to be normal in all members of the family, the plasma malondialdehid values of mother, father and one daughter were measured as high.