Metin ERDOĞAN, Mustafa KÖSE¹, Kürşat KARTAL

Afyonkarahisar Yöresi Koyun Akciğer Kılkurdu Türlerinin Moleküler Karakterizasyonu

Bu araştırma, Afyonkarahisar yöresinde koyunlarda akciğer kılkurdu enfeksiyonlarının moleküler epidemiyolojisi ve akciğer kılkurdu türlerinin moleküler karakterizasyonunu ortaya koymak amacıyla yapılmıştır. Bu amaçla 5 farklı lokalitede akciğer kılkurtları ile doğal enfekte 10 sürüden akciğer kılkurdu birinci dönem larvalarını izole etmek için dışkı örnekleri toplandı. Baermann-Wetzel yöntemi ile separe edilen akciğer kılkurdu 1. dönem larvalarının spin kolon yöntemiyle ticari kit (Thermo) kullanılarak DNA'ları çıkarıldı. PCR'da akciğer kıl kurtlarının 28S rRNA bölgelerine ait primerler (Dictyocaulus filaria: F-gctacaaaatcgcatacgaacg, R-actccttagcggttaccga; Cystocaulus ocreatus: F-cggtttgtttagcatgtccaaagtc, R-tctctgacttcgtcctgc; Muellerius capillaris: F-aaaggcccaacgctgaa, R-cctctgacttcgtcctgc) FastPCR programı ile dizayn edilerek kullanıldı. Toplam 7 izolattan elde edilen DNA PCR ürünlerinin 28S rRNA gen bölgelerinin DNA dizileme analizi yapıldı. Bir ve 2. izolatlardan elde edilen 952 bp uzunluğundaki dizilerinin %100 D. filaria, 4, 5 ve 6. izolatlardan elde edilen768 bp uzunluğundaki dizilerinin %100 C. ocreatus, 7. izolattan elde edilen 780 bp uzunluğundaki dizinin %100 M. capillaris ve 3. izolattan elde edilen 780 bp uzunluğundaki dizinin ise %99 ihtimalle M. capillaris olduğu görülmüştür. İzolat 7'nin 702. bazının heterozigot yapıda olması ve izolat 3'te 117 ve 718. bazlarında mutasyon olması bir alt tür olabileceğini düşündürmüştür. Bir sürüde rastlanılan Neostrongylus linearis larvasından DNA elde edilememiş, Sürülerde Protostrongylus rufescens larvasına rastlanmamıştır

Molecular Characterization of Lungworm Species of Sheep in Afyonkarahisar Region

The present study was conducted to investigate molecular epidemiology of lungworm infections and molecular characterization of lungworm species of sheep in Afyonkarahisar region. Fecal samples were gathered from 10 flocks in 5 different localization to isolate first stage larvae of lungworm. First stage larvae of lungworms were seperated with BaermannWetzel method and DNAs were extracted with spin-column method by using commercial kit (Thermo). Primers belonged to 28S rRNA region of lungworms (Dictyocaulus filaria: F-gctacaaaatcgcatacgaacg, R-actccttagcggttaccga; Cystocaulus ocreatus: F-cggtttgtttagcatgtccaaagtc, R-tctctgacttcgtcctgc; Muellerius capillaris: F-aaaggcccaacgctgaa, R-cctctgacttcgtcctgc) were used with the design of FastPCR software in PCR. DNA sequence analysis was perfomed on PCR products of 28S rRNA gene regions obtained from seven isolates. 952 bp length sequences of first and second isolates were D. filaria with the probability of 100%; 768 bp length sequences of 4th, 5th and 6th isolates were C. ocreatus with the probability of 100%; 780 bp length sequence of 7th isolate was M. capillaris with the probability of 100% and 780 bp length sequence of 3rd isolate was M. capillaris with the probability of 99%. Heterozygote structure of base number 702 of 7th isolate and presence of mutations in base numbers 117 and 718 of 3rd isolate suggest probability of a subspecies. DNA of Neostrongylus linearis larvae which was detected in one flock could not be obtained. Protostrongylus rufescens larvae was not found in flocks

PDF

___

1. Levine ND., 1980. Nematode Parasites of Domestic Animals and Man. 2nd ed., 222-239, Burgess Publishing Company, Minneapolis.
2. Anderson RC., 1978. Keys to the genera of the superfamily Metastrongyloidea. In "CIH keys to the nematode parasites of vertebrates", Ed., RC Anderson, AG Chabaud, S. Willmott, 1st ed., 1-40, Commonwealth Agricultural Bureaux, Farnham Royal, U.K.
3. Soulsby EJL., 1986. Helminths, Arthropods and Protozoa of Domesticated Animals. 7 th Ed, 262- 276, Bailliere Tindall, London.
4. Schnieder T., 2000. Helminthosen der Wiederkäuer. In "Veterinärmedizinische Parasitologie", Ed., M Rommel, J Eckert, E Kutzer, W Körting, T Schnieder, 5th ed., 192-295, Parey Buchverlag, Berlin.
5. Urquhart GM., Armour J., Duncan JL., Dunn AM., Jennings FW., 1996. Veterinary Parasitology. 2nd ed., 59-60, Blackwell Publishing, London.
6. Yıldırım A., İça A., 2005.Kayseri yöresinde koyunlarda akciğer kılkurdu enfeksiyonlarının prevalansı. Erciyes Üniv Vet Fak Derg, 2, 73-78.
7. Yıldız K., 2006. Prevalence of lungworm infection in sheep and cattle in the Kirikkale province. Türkiye Parazitol Derg, 30, 190-193.
8. Yıldız K., Aydenizöz M., 2001. Kırıkkale koyunlarında helmintlerin yayılışı. Ankara Üniv Vet Fak Derg, 48, 179-182.
9. Sevimli FK., Kozan E., Köse M., Eser M., 2006. Dışkı muayenesine göre Afyonkarahisar İli koyunlarında bulunan helmintlerin yayılışı. Ankara Üniv Vet Fak Derg, 53, 137-140.
10. Bağcı Ö., Bıyıkoğlu G., 2003. İstanbul’da değişik kombinalarda kesilen koyunlarda akciğer kılkurtlarının yayılışı. Türkiye Parazitol Derg, 27, 139-143.
11. Değer S., Biçek K., Akdemir C., Taş Z., 2000. Van Belediye mezbahasında kesilen koyunlarda akciğer kılkurtlarının yayılışı. Van Vet J, 27, 215- 236.
12. Umur Ş., Özkan MÖ., 1998. Kars yöresi sığır ve koyunlarında akciğer kılkurtları. Türkiye Parazitol Derg, 22, 88-92.
13. Taşan E., Köroğlu E., Altaş MG., 1997. Elazığ bölgesinde akciğer kılkurtlarının yayılışı. F Ü Sağlık Bil Derg, 11, 273-276.
14. Celep A., Açıcı M., Çetindağ M., Gürbüz İ., 1995. Samsun yöresi koyunlarında paraziter epidemiyolojik çalışmalar. Türkiye Parazitol Derg, 19, 290-296.
15. Gargılı A., 1995. Trakya'da kıvırcık koyunlarında akciğer nematodlarının yayılışı. İstanbul Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Türkiye.
16. Dik B., Sevinç F., Köse M., 1995. Konya yöresi koyunlarında akciğer kılkurtlarının yayılışı. Veterinarium, 6, 79-81.
17. Doğanay A., Burgu A., Toparlak M., 1989. Ankara yöresinde koyunlarda metastrongylose. Etlik Vet Mikrobiyol Derg, 6, 99-113.
18. Epe C., Samson-Himmelstjerna GV., Schnieder T., 1997. Differences in a ribosomal DNA sequence of lungworm species (Nematoda: Dictyocaulidae) from fallow deer, cattle, sheep and donkeys. Res Vet Sci, 62, 17-21.
19. Carreno RA., Nadler SA., 2003. Phylogenetic analysis of the Metastrongyloidea (Nematoda: Strongylida) inferred from ribosomal RNA gene sequences. J Parasitol, 89, 965-973. 20. Höglund J., Morrison DA., Divina BP.,
Wilhelmsson E., Mattsson JG., 2003. Phylogeny of Dictyocaulus (lungworms) from eight species of ruminants based on analyses of ribosomal RNA data. Parasitology, 127, 179-187.
21. Johnson M., Abs EL-Osta YG., Hu M., Gasser RB., 2004. An electrophoretic tool for the genetic characterisation and delineation of lungworms. Mol Cell Probes, 18, 197-203.
22. Jenkins EJ., Appleyard GD., Hoberg EP., Rosenthal BM., Kutz SJ., Veitch AM., Schwantje HM., Elkin BT., Polley L., 2005. Geographic distribution of the muscle-dwelling nematode Parelaphostrongylus odocoilei in North America, using molecular identification of first-stage larvae. J Parasitol, 91, 574-584.
23. Carreno RA., Diez-Banos N., Hidalgo-Arguello MR., Nadler SA., 2009. Characterization of Dictyocaulus species (Nematoda: Trichostrongyloidea) from three species of wild ruminants in Northwestern Spain. J Parasitol, 95, 966-970.
24. Chilton NB., Huby-Chilton F., Gasser RB., Beveridge I., 2006. The evolutionary origins of nematodes within the order Strongylida are related to predilection sites within hosts. Mol Phylogenet Evol, 40, 118-128.