Escherichia coli ve Klebsiella pneumoniea izolatlarında AmpC beta laktamaz sıklığının belirlenmesi ve tespit yöntemlerinin karşılaştırılması
Bu çalışmanın amacı altın standart olarak PZR yöntemini kullanarak klinik izolatlardan üreyen E.coli ve K. pneumoniae suşlarında plazmid ile kodlanmış AmpC beta-laktamazın araştırılması ve plazmid aracılı AmpC beta-laktamazların saptanması için sefoksitin-Hodge testinin ve kloksasilin inhibisyon testinin etkinliğinin karşılaştırılmasıdır. İki yıl boyunca 3,450 hastanın klinik izolatlarından sefoksitine dirençli 22 E.coli ve 18 K. pneumoniae suşu toplanmıştır. Disk difuzyon testinde sefoksitin dirençli olan suşlara AmpC geni varlığının araştırılması amacı ile MOX,CIT, EBC, FOX, DHA, EBC primerleri kullanılarak multipleks PZR uygulanmıştır. AmpC geni tesbit edilen suşlar Sefoksitin-Hodge testi ve kloksasilin inhibisyon testi ile fenotipik olarak incelenmiştir. 40 izolattan dokuzu, GSBL üretimini teyit edenklavulanik asit tarafından, altısı ise kloksasilin tarafındaninhibe edildi, dokuzu sefoksitin-Hodge testi ile pozitif saptandı. Dört izolat, kombinasyon halinde GSBL ve AmpC beta-laktamaz eksprese etti. AmpC betalaktamaz genleri PZR ile incelenmiş, 40 sefoksitine dirençli izolattan 11 tanesinin plasmid aracılı AmpC beta laktamaz sentezlediği görülmüştür (Beş E.coli ve altı K. pneumoniae). 11 izolattan iki CIT, iki EBC, altı FOX, bir izolatta hem FOX ve EBC tipi gen saptanmıştır. İki fenotipik tarama yöntemi kappa analizi ile karşılaştırılmış, Hodge testi plazmid aracılı AmpC laktamazların saptanmasında rehberlerin aksine kloksasilin inhibisyon testinden daha hassas olduğu görülmüştür. Rutin laboratuvarlarda uygulanabilecek daha kolay, ekonomik ve güvenilir bir fenotipik yönteme ihtiyaç olduğu tesbit edilmiştir.
___
- 1) Alain Philippon, Guillaume Arlet, George A.
Jacoby. Plazmid-determined AmpC- type beta-lactamases.
Antimicrobial Agents Chemotheraphy 2002;1–11.
2) A.S. Khan, S.J. Dancer, H. Humphreys. Priorities
in the prevention and control of multidrug-resistant
Enterobacteriaceae in hospitals. Journal of Hospital
Infection, 2002; 85-93.
3) Bengtake Jaurin, Thomas Grundstrom , Thomas
Edlund, et al. The E. coli beta-lactamase attenuator
mediates growth rate-dependent regulation. Nature
1981; 221–225.
4) David L. Paterson., Resistance in Gram-Negative
Bacteria. The American Journal of Medicine 2006; 520-
528.
5) David L. Paterson, Robert A. Bonomo. Extended-
Spectrum beta-lactamases: a Clinical Update. Clinical
Microbiology Reviews 2005; 657-686.
6) Demirbakan H., Midilli K., Ogunc D., ve ark.
Investigation of plazmid-mediated AmpC beta-lactamase
types in Klebsiella spp. and Escherichia coli isolates
resistant or intermediate to cefoxitin. Mikrobiyoloji Bulteni
2008; 545-551.
7) Dobryan M. Tracz, David A. Boyd, Louis Bryden,
et al. Mulvey.Increase in AmpC promoter strength due
to mutations and deletion of the attenuator in a clinical
isolate of cefoxitin- resistant Escherichia coli as determined
by RT-PZR. Journal of Antimicrobial Chemotherapy 2005;
768–772
8) F. Javier Perez-Perez.Nancy D. Hanson. Detection
of Plazmid-Mediated AmpC beta-Lactamase Genes in
Clinical Isolates by Using Multiplex PZR. Journal of Clinical
Microbiology 2002; 2153-2162.
9) George A. Jacoby. AmpC beta-lactamases.
Clinical Microbiology Reviews 2009; 161–182.
10) Guilene Barnaud, Guillama Arlet, Charlotte
Verdet, et al. Salmonella enteritidis: AmpC Plazmid-
Mediated Inducible β-Lactamase (DHA-1) with an AmpR
Gene from Morganella morganii. Antimicrobial Agents
and Chemotherapy 1998; 2352-2358.
11) Guilene Barnaud, G., Roger Labia., Laurent
Raskine. Extension of resistance to cefepime and cefpirome
associated to a six amino acid deletion in the H-10 helix of
the cephalosporinase of an Enterobacter cloacae clinical
isolate. FEMS Microbiology Letters 2001; 185-190.
12) Kenneth S. Thomson., Controversies about
Extended-Spectrum and AmpC beta-lactamases.
Emerging Infectious Diseases 2001; 333-336.
13) L. K. Siu, Po-Liang Lu, J.-Y. Chen, et al. High-level
expression of AmpC beta-lactamase due to insertion of
nucleotides between 10 and 35 promoter sequences
in Escherichia coli clinical isolates: cases not responsive
to extended-spectrum-cephalosporin treatment.
Antimicrobial Agents and Chemotherapy 2003; 2138–
2144.
14) Louis B. Rice, Robert A. Bonomo. betalactamases:
which ones are clinically important?. Drug
Resistance Updates 2000 ; 178-189.
15) Michael A. Pfaller, and John Segreti. Overview of
the epidemiological profile and laboratory detection of
extended-spectrum beta-lactamases. Clinical Infectious
Diseases 2006; 153-163.
16) Michael R. Mulvey, Elizabeth Bryce, David A. Boyd,
et al. Molecular characterization of cefoxitin-resistant
Escherichia coli from Canadian hospitals. Antimicrobial
Agents and Chemotherapy 2005 ; 358–365.
17) Nadine Honore, Marie Helene Nicolas, Stawart
T. Cole. Inducible cephalosporinase production in clinical
isolates of Enterobacter cloacae is controlled by a
regulatory gene that has been deleted from Escherichia
coli. The EMBO Journal 1986; 3709-3714.
18) Nancy D. Hanson. AmpC β-lactamases: what do
we need to know for the future? Journal of Antimicrobial
Chemotheraphy 2003; 2-4.
19) Nancy D. Hanson, Christine C. Sanders.
Regulation of inducible AmpC β-lactamase expression
among Enterobacteriaceae. Current Pharmaceutical
Design 1999; 881–894.
20) CLSI. Clinical and Laboratory Standards Institute.
Performance standards for antimicrobial susceptibility
testing. Approve Standard M100-S20. Wayne:ABD;2011
21) EUCAST Klinik ve/veya epidemiyolojik önemi
olan direnç mekanizmaları ve direnç özelliklerini saptama
kılavuzu. Versiyon 2.0, 2017.
22) Philip E. Coudron, Ellen S. Moland, Kenneth S.
Thomson. Occurrence and detection of AmpC ß-lactamases
among Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, and
Proteus mirabilis isolates at a veterans medical center.
Journal of Clinical Microbiology 2000; 38:1791-1796.
23) Ronald N. Jones., Important and emerging
β-lactamase- mediated resistances in hospital-based
pathogens: the AmpC enzymes. Diagnostic Microbiology
and Infectious Disease 1998; 461–466.
24) S. Peter-Getzlaff, S. Polsfuss, M. Poledica, et al.
Detection of AmpC Beta-Lactamase in Escherichia coli:
Comparison of Three Phenotypic Confirmation Assays and
Genetic Analysis. Journal of Clinical Microbiology 2011;
2924-2932.
25) Serpil Coskun, Nurten Altanlar , Sefoksitine
Dirençli Escherichia coli ve Klebsiella Pneumoniae Klinik
İzolatlarında Plazmid Aracılı AmpC Beta-Laktamaz Tespiti.
Mikrobiyoloji Bulteni 2012; 375-385.