Sibel KÖKTÜRK, Süreyya CEYLAN, MELDA YARDIMOĞLU YILMAZ, Hakkı DALÇIK, SÜHEYLA GONCA

Farklı tespit solusyonlarıyla perfüzyon ve immersiyon tespit yöntemlerinin değişik dokularda ışık mikroskobik düzeyde karşılaştırılması

Amaç: Bu çalışmanın amacı değişik tespit solusyonlarıyla perfüzyon ve immersiyon tespit yöntemlerini kullanarak farklı dokularda oluşan histolojik farklılıkları değerlendirmektir. Yöntem: Wistar cinsi dişi sıçanlar perfüzyon ve immersiyon tespit yöntemleri kullanılarak tespit edildi. Sıçanların beyin, karaciğer, böbrek ve ovaryum gibi çeşitli organlarından doku örnekleri alındı. Tespit sırasında 0.1 M fosfat tamponlu % 10 formalin, 0.1 M kakodilat tamponlu % 4 paraformaldehit ve 0.1 M kakodilat tamponlu % 2.5 gluteraldehit (CaCl2 ve MgCl2'lü) olmak üzere değişik tespit solusyonları kullanıldı. Perfüzyon ve immersiyon tespit yöntemlerinin avantajları ve dezavantajları değerlendirildi. Doku kesitleri tespit artefaktları, tespit gradienti ve doku komponentlerinde oluşan değişiklikler bakımından incelendi. Bulgular: Mikroskobik incelemeler sonucunda perfüzyonun doku morfolojisini daha iyi koruduğu görüldü. Tespit solusyonlarıyla yaptığımız karşılaştırmada da 0.1 M kakodilat tamponlu % 4 paraformaldehit perfüzyonuyla iyi sonuçlar elde edildi. Sonuç: Perfüzyon yöntemiyle tespit solusyonu hücrelere vasküler sistem aracılığıyla hızlı bir şekilde ulaştığından dokuda istenmeyen tespit artefaktları ortadan kaldırıldı.

Anahtar Kelimeler:

Perfüzyon, Doku tesbiti, Histositolojik preparasyon teknikleri, Solüsyonlar, Sıçanlar, Mikroskopi, Işık, İmersiyon, Histolojik teknikler, Tespit solüsyonları, Sitolojik teknikler

Comparison of histological differences in different tissues using perfusion and immersion fixation procedures with different fixatives at light microscopy

Objective: The aim of this study was to evaluate the histological differences in different tissues by using perfusion and immersion fixation procedures with different fixatives. Methods: Wistar rats were fixed by perfusion and immersion fixation procedures. Tissue samples were obtained from the brain, liver, kidney and ovaries of rats. 10% formalin in 0.1 M phosphate buffer, 4% paraformaldehyde in 0.1 M cacodylate buffer and 2.5% glutaraldehyde in 0.1 M cacodylate buffer (with CaCl2 and MgCl2) were used as fixatives. Advantages and disadvantages of perfusion and immersion fixation methods were evaluated. The sections were evaluated according to the artefacts of fixation, gradient of fixation and variations of tissue components. Results: Results of microscopical studies revealed that tissue morphology was better preserved by perfusion method. Better results was obtained with 4% paraformaldehyde in 0.1 M cacodylate buffer. Conclusion: Fixatives move rapidly to the cells through vascular system with perfusion method, artefacts of fixation were successfully removed.

Keywords:

Perfusion, Tissue Fixation, Histocytological Preparation Techniques, Solutions, Rats, Microscopy, Light, Immersion, Histological Techniques, Fixatives, Cytological Techniques,

PDF

___

Hopwood D. Fixation and fixatives. In: Bancroft JD, Stevens A, editor. Theory and practice of histological techniques. 4th ed. Hong Kong: 1996. p.23-46.
Thorball N, Tranum-Jensen J. Vascular reactions to perfusion fixation. J Microscopy 1983;129:123-39.
Rostgaard J, Qvortrup K. Electron microscopic demonstration of filamentous molecular sieve plugs in capillary fenestrate. Microvascular Res 1996;53:1-13.
Larsson HO, Lorentzon R, Boquist L. Structure of parathyroid glands, as revealed by different methods of fixation. Cell Tissue Res 1984;235:51-8.
Wild P, Manser EM. Ultrastructural morphometry of parathyroid cells in rats of different ages. Cells Tissues Res 1985;240:585-91.
Wild P, Schraner EM, Augsburger H, Berlinger R, Pfister R. Ultrastructural alteration in mammalian parathyroid glands induced by fixation. Acta Anat 1986;126:87-96.
Wild P, Kellner SJ, Schraner EM. Parathroid cell variants may be provoked during immersion fixation. Histochemistry 1987;87:263-71.
Kanter M, Dalçık H, Köksal V, Öztaş M, Özcan O. Parathyroid cell variants may be induced by different fixatives I: A light microscopic study. Gazi Med J 1996;7:61-65.
Roberts JC, Mccrossan MV, Jones HB. The case for perfusion fixation of large tissue samples for ultrastructural pathology. Ultrastructural Pathol 1990;14:177-91.
Epstein DL, Rohent JW. Morphology of trabecular meshwork and inner-wall endothelium after cationized ferritin perfusion in the monkey eye. Invest Ophthalmolog Y Visual Sci 1991;32:160-71.
Ciuera D, Gil J. Morphometry of capillaries in three zones of rabbit lungs fixed by vascular perfusion. Anatomical Record 1996;244:182-92.
Adickes ED, Folkerth RD, Sims KL. Use of perfusion fixation for improved neuropathologic examination. Arch Pathol Lab Med 1997;121:1199-206.