ÇİĞDEM (CROCUS BİFLORUS) YUMRULARINDAN PROTEAZ ENZİMİNİN SAFLAŞTIRILMASI VE SAFLAŞTIRILAN ENZİMİN KAZEİNİN KOAGÜLASYONUNDA KULLANILABİLİRLİĞİNİN ARAŞTIRILMASI

Son yıllarda, hayvanlardan insanlara geçen bazı hastalıklarda (SARS, deli dana, domuz ve kuş gribi) artış olduğu bilinmektedir. Tüketicilerde, hayvansal proteazların gıda maddesi yapımında kullanımı bu hastalıkların kendilerine bulaşacağına dair endişelere yol açmaktadır. Bu nedenlerden dolayı bitkisel kaynaklı ürünlere bir talep artışı olmuştur.  Ticari olarak satılan enzimlerin ise sadece az bir kısmının bitkisel kaynaklı olması, araştırmacıları ticari olarak da kullanılabilecek yeni bitkisel proteaz kaynakları aramaya sevk etmiştir. Bu çalışmada, ilk kez çiğdem (Crocus biflorus) yumrularından proteaz enzimi saflaştırılmış ve bazı karakteristik özellikleri belirlenmiştir. Enzim, amonyum sülfat çöktürmesi ve iyon değişim kromatografisi ile 86 kat saflaştırılmıştır. Proteaz enziminin optimum pH’sı 5.5 ve optimum sıcaklığı 50oC olarak bulunmuştur. Vmax ve KM değerleri ise sırasıyla 47 mg/L.dak ve 0.9 g/L olarak hesaplanmıştır. Enzimin molekül ağırlığı SDS-PAGE ile 35 kDa olarak hesaplanmıştır. Saflaştırılan enzimin, peynir yapımının ilk basamağı olan kazeinin koagülasyonu işlemlerinde kullanılabileceği belirlenmiştir. 

PURIFICATION OF PROTEASE ENZYME FROM ÇİĞDEM (CROCUS BIFLORUS) TUBERS AND INVESTIGATION OF USABILITY OF THE PURIFIED PROTEASE ENZYME IN COAGULATION OF CASEIN

It is known that in some diseases (SARS, mad cow, pig and bird flu) that have passed from animals to humans have increased in recent years. In consumers, the use of animal proteases in the production of food products leads to concerns about the spread of these diseases. For these reasons, it has been an increase in demand for the product obtained from plant sources. The fact that only a small proportion of commercially available enzymes are herbaceous, have encouraged researchers to search for new herbal protease sources that can be used commercially. In this study, for the first time protease enzyme was purified from the tubers of a Crocus biflorus and characterized. The protease enzyme was purified 86 fold by ammonium sulfate precipitation and ion exchange chromatography. Optimum pH and temperature was found as 5.5 and 50 °C. The values of Vmax and KM were calculated as 47 mg/mL.min and 0.9 g/L, respectively. The molecular weight of the enzyme was calculated to be 35 kDa by using SDS-PAGE. It was determined that the purified enzyme can be used in the process of casein coagulation, the first step of cheese making. 

___

  • Referans1 Akyol, Y., Yetişen, K., Özdemir, C., Bozdağ, B., & Kocabaş, O. (2012). Türkiye’deki Crocus biflorus Miller subsp. tauri (Maw) Mathew (Iridaceae) Üzerine Morfolojik ve Anatomik Bir Çalışma. Iğdır Univ. J. Inst. Sci. Tech., 2:15–20.
  • Referans2 Antão, C. M., & Malcata, F. X. (2005). Plant serine proteases: biochemical, physiological and molecular features. Plant Physiol. Biochem. PPB, 43(7):637–50. https://doi.org/10.1016/j.plaphy.2005.05.001
  • Referans3 Berridge, N. J. (1945). The purification and crystallization of rennin. Biochem. J., 39(2):179–86.
  • Referans4 Beynon, R., & Bond, J. S. (2000). Proteolytic Enzymes. Biochem. Educ., 18(1):359. https://doi.org/10.1016/0307-4412(90)90038-P
  • Referans5 Bradford, M. M. (1976). A rapid and sensitive method for the for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein dye-binding. Anal. Biochem., 72:248–254.
  • Referans6 Cavalcanti, M. T. H., Teixeira, M. F. S., Lima Filho, J. L., & Porto, A. L. F. (2004). Partial purification of new milk-clotting enzyme produced by Nocardiopsis sp. Bioresour. Technol., 93(1):29–35. https://doi.org/10.1016/j.biortech.2003.10.003
  • Referans7 Demir, Y., Alayli, A., Yildirim, S., & Demir, N. (2005). Identification of protease from Euphorbia amygdaloides latex and its use in cheese production. Prep. Biochem. Biotechnol., 35(4):291–299. https://doi.org/10.1080/10826060500218107
  • Referans8 Fadýloǧlu, S. (2001). Immobilization and characterization of ficin. Nahrung - Food, 45(2):143–146. https://doi.org/10.1002/1521-3803
  • Referans9 Kumar Dubey, V., & Jagannadham, M. V. (2003). Procerain, a stable cysteine protease from the latex of Calotropis procera. Phytochemistry, 62(7):1057–1071. https://doi.org/10.1016/S0031-9422(02)00676-3
  • Referans10 Menon, M., Vithayathil, P. J., Raju, S. M., & Ramadoss, C. S. (2002). Isolation and characterization of proteolytic enzymes from the latex of Synadenium grantii Hook, “f.” Plant Sci., 163(1):131–139. https://doi.org/10.1016/S0168-9452(02)00085-7
  • Referans11 Modler, H. W. (1985). Functional Properties of Nonfat Dairy Ingredients - A Review. Modification of Products Containing Casein. J. Dairy Sci., 68(9):2195–2205. https://doi.org/10.3168/jds.S0022-0302(85)81091-2
  • Referans12 Sumantha, A., Sandhya, C., Szakacs, G., Soccol, C. R., & Pandey, A. (2005). Production and partial purification of a neutral metalloprotease by fungal mixed substrate fermentation. Food Technol. Biotechnol., 43(4):313–319.
Gıda-Cover
  • ISSN: 1300-3070
  • Yayın Aralığı: Yılda 6 Sayı
  • Başlangıç: 1976
  • Yayıncı: Prof. Dr. İbrahim ÇAKIR
Sayıdaki Diğer Makaleler

ANKARA’DA SATIŞA SUNULAN ÇİĞ SÜT VE SÜT ÜRÜNLERİNDE LISTERIA SPP. VARLIĞININ BELİRLENMESİ

Pinar ŞANLIBABA, Başar UYMAZ TEZEL, Gürcü Aybige ÇAKMAK

FARKLI HAYVAN SÜTLERİNDEN ÜRETİLEN TEREYAĞLARININ DEPOLAMA SÜRESİNCE OKSİDASYON STABİLİTESİ VE BAZI ÖZELLİKLERİ ÜZERİNE KARŞILAŞTIRMALI BİR ARAŞTIRMA

Songül ÇAKMAKÇI, Deren TAHMAS KAHYAOĞLU

KETEN TOHUMU İLE ZENGİNLEŞTİRİLMİŞ ERİŞTELERİN FİZİKOKİMYASAL, DUYUSAL, PİŞME ÖZELLİKLERİ VE YAĞ ASİDİ KOMPOZİSYONUN BELİRLENMESİ

Ferhat YÜKSEL, Havva Buse AKDOĞAN, Sümeyye ÇAĞLAR

SİRMO (Allium vineale L.), MENDİ (Chaerophyllum macropodum Boiss.) VE SİYABO (Ferula rigidula DC.)’NUN ANTİMİKROBİYAL VE ANTİOKSİDAN ÖZELLİKLERİ

Şenol KÖSE, ELVAN OCAK

PÜSKÜRTMELİ-DONDURARAK KURUTMA İŞLEMİNİN MALTODEKSTRİNİN FİZİKSEL ÖZELLİKLERİ ÜZERİNE ETKİSİ

Hilal İşleroğlu, Banu Koç, İzzet Türker

LİPAZ ENZİMİ VE DESTEK KÜLTÜR KULLANIMININ KEÇİ PEYNİRİNİN OLGUNLAŞMASI ÜZERİNE ETKİLERİ

Hasan Uzkuç, Onur Güneşer, Yonca Yüceer

KIRMIZI ÜZÜM SUYU ÜRETİM SÜRECİNDE RESVERATROL MİKTARI VE BİYOAKTİF ÖZELLİKLERDE MEYDANA GELEN DEĞİŞİMLER

Mehmet GÜLCÜ, Figen DAĞLIOĞLU

GELENEKSEL ÜRÜNLERİMİZDEN OLAN KÖFTÜRÜN BAZI BİYOAKTİF, FİZİKOKİMYASAL VE KİMYASAL ÖZELLİKLERİ

Fatma BECERİKLİ, Fikri BAŞOĞLU

İZMİR’DE SATIŞA SUNULAN SU ÜRÜNLERİNDE KOAGÜLAZ POZİTİF STAPHYLOCOCCUS AUREUS’UN İNSİDANSI VE ANTİBİYOTİK DİRENCİ

Fatma ÖZTÜRK, Hatice GÜNDÜZ

FARKLI BİTKİSEL EKSTRAKTLARIN AYÇİÇEĞİ YAĞININ OKSİDATİF STABİLİTESİ ÜZERİNE ETKİLERİ

Ayhan BAŞTÜRK, Bahattin TABAR